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Cy5.5-马来酰亚胺

发布人:上海药诚医药科技合伙企业(有限合伙)

发布日期:2026/7/3 8:57:31

一、基础概述

Cy5.5-MAL 是巯基特异性近红外活性花菁荧光染料,由 Cy5.5 荧光母核 + 马来酰亚胺(Maleimide)活性基团组成,专门用于定点标记含巯基(-SH)生物分子,是活体成像、蛋白偶联主流试剂。
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磺化Cy5.5-MAL结构式
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商品化试剂实物

1. 基础参数

  • 常用 CAS:1594414-90-0(磺化水溶型)、1593644-50-8(脂溶普通型)

  • 外观:深蓝 / 深紫色粉末,避光、防潮

  • 分子量:760–1040 Da(磺化 / 非磺化版本差异大)

  • 荧光光谱(核心)

    • 最大激发 λₑₓ:675–685 nm

    • 最大发射 λₑₘ:695–710 nm

    • 摩尔消光系数:190000–250000 M⁻¹・cm⁻¹

    • 量子产率:0.20–0.27;pH4–10 荧光强度几乎无变化

  • 溶解性分两类:

    1. 普通 Cy5.5-MAL:溶于 DMSO、DMF、甲醇;几乎不溶于水,标记需加有机助溶剂

    2. 磺化 sulfo-Cy5.5-MAL:双磺酸修饰,完全水溶,适合不耐有机溶剂的蛋白 / 抗体VectorLabs

二、标记反应原理(马来酰亚胺核心特性)

1. 特异性反应靶点

pH 6.5–7.5 中性缓冲液下,专一结合巯基(半胱氨酸 - SH),与氨基(赖氨酸)反应速度差 1000 倍,定点标记、副反应极少。
反应:迈克尔加成,生成稳定不可逆硫醚键,偶联产物常温 / 体内长期稳定。

2. pH 关键控制(实验重点)

  • pH 6.5–7.5:最优,只标记巯基

  • pH>7.8:马来酰亚胺快速水解失活,同时非特异性结合赖氨酸氨基,背景升高

  • 禁止高 pH、长时间孵育

3. 样品预处理要点

蛋白 / 多肽需先用 DTT/TCEP 还原二硫键,再透析除去还原剂(还原剂会消耗染料),暴露出游离 - SH 才能标记。

三、核心优势

  1. 近红外窗口成像:690–710 nm 落在生物组织第一近红外窗口,血红蛋白、水自发荧光极低,组织穿透深度 2–4 mm,适合小动物活体肿瘤、皮下组织示踪;

  2. 光稳定性优于 Cy5,荧光亮度高、信噪比好;

  3. 定点标记:仅修饰半胱氨酸,不破坏蛋白抗原结合位点,优于氨基随机标记(NHS 酯);

  4. 可与 Cy3、Cy7、IRDye800 多通道同时成像,光谱无重叠。

四、主要应用场景

  1. 活体小动物近红外成像(IVIS):标记抗体、多肽、纳米药物、外泌体,体内肿瘤靶向示踪、药物分布检测;

  2. 蛋白 / 抗体定点荧光标记:WB 近红外荧光二抗、免疫荧光、流式细胞;

  3. 多肽、巯基修饰 DNA/RNA、纳米颗粒(金纳米、脂质体)偶联;

  4. 细胞内巯基蛋白示踪、生物传感、分子探针构建。


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