武汉艾美捷科技有限公司

一、产品背景与检测原理

乙酰胆碱酯酶（Acetylcholinesterase，简称AChE）是一种通过水解作用降解神经递质乙酰胆碱的功能性酶，其水解产物为胆碱和乙酸盐基团。该酶主要分布于神经肌肉接头及中枢神经系统的胆碱能突触处，通过快速水解乙酰胆碱，有效终止突触信号的传递，保障神经信号的精准调控。AChE的催化效率极高，每个酶分子每秒可降解约5000个乙酰胆碱分子。此外，乙酰胆碱酯酶也存在于红细胞膜表面，构成Yt血型抗原系统。在生物体内，AChE存在多种分子形式，这些形式在催化活性上基本一致，但在寡聚体组装方式和细胞表面锚定模式上存在差异。

由艾美捷代理AAT Bioquest推出的Amplite™ 荧光法乙酰胆碱酯酶检测试剂盒，绿色荧光，货号：AAT-11401，是目前检测AChE活性最灵敏的方法之一。其检测原理为：AChE催化乙酰硫代胆碱水解生成硫代胆碱，产物与试剂盒中特有的Thiolite™ Green荧光探针反应，产生绿色荧光信号。荧光强度与硫代胆碱的生成量呈正比，从而可准确定量反映AChE的酶活性水平。相较于比色法，荧光法具有更高的灵敏度，尤其适用于低浓度样品和微量样本的检测需求。

二、试剂盒组分与储存条件

使用前请将所有组分置于室温条件下解冻。未使用的储备液建议分装为单次用量，于-20°C保存，避免反复冻融。

三、储备液配制方法

1. Thiolite™ Green储备液（200×）

向Thiolite™ Green组分（Component A）瓶中加入50 μL DMSO（Component E），充分溶解，即得200× Thiolite™ Green储备液。

2. 乙酰硫代胆碱储备液（500×）

向乙酰硫代胆碱组分（Component C）瓶中加入0.6 mL去离子水，充分溶解，即得500× 乙酰硫代胆碱储备液。

3. 乙酰胆碱酯酶标准品储备液

向乙酰胆碱酯酶标准品（Component D）瓶中加入100 μL含0.1% BSA的去离子水，充分溶解，即得50 U/mL的AChE标准品溶液。

四、工作液配制

取10 μL 500× 乙酰硫代胆碱储备液和25 μL 200× Thiolite™ Green储备液，加入5 mL检测缓冲液（Component B）中，充分混匀，定容至总体积5.03 mL，即得AChE工作液。

> 注：AChE工作液稳定性较差，配制后需在30分钟内使用完毕。工作液需注意避光保存。

五、实验操作流程

1. 向检测孔中加入50 μL AChE标准品或待测样品；

2. 加入50 μL AChE工作液；

3. 室温条件下孵育10～30分钟；

4. 使用荧光微孔板酶标仪，在激发波长490 nm/发射波长525 nm处读取荧光强度值。

六、关键实验参数

-检测仪器：荧光微孔板酶标仪

-激发波长：490 nm

-发射波长：525 nm

-截止波长：515 nm

-推荐板型：黑色实心底微孔板

七、注意事项

1. 工作液及Thiolite™ Green储备液需注意避光保存，避免光照导致荧光探针淬灭或降解；

2. AChE工作液不稳定，应于配制后30分钟内完成使用，建议根据实验用量现配现用；

3. 建议每个浓度标准品及待测样品设置复孔，以保证数据的准确性和可重复性；

4. 实验操作中请使用无酶枪头和洁净容器，避免外源酶污染对结果产生干扰；

5. 荧光检测对微孔板材质有特定要求，请务必使用黑色实心底微孔板，以避免孔间信号串扰和背景荧光干扰；

6. 使用激发波长490 nm、发射波长525 nm进行检测时，如仪器配备515 nm截止滤光片，建议装配使用，可进一步优化信噪比。

八、产品优势总结

本试剂盒采用荧光法检测原理，相较于传统比色法具有更高的检测灵敏度，适用于低丰度样品的AChE活性定量分析。操作流程简便，孵育时间短（10～30分钟），配合荧光酶标仪即可完成高通量检测，可广泛应用于神经生物学研究、药物筛选、酶动力学分析及临床样本检测等领域。特有的Thiolite™ Green荧光探针具有良好的光稳定性和信噪比，确保检测结果可靠、数据重复性高。