武汉艾美捷科技有限公司

一、产品背景与原理

乙酰胆碱酯酶（Acetylcholinesterase，简称AChE）是一种在神经系统中发挥关键作用的水解酶，其主要功能是降解神经递质乙酰胆碱，将其分解为胆碱和乙酸盐基团。该酶主要分布于神经肌肉接头以及中枢神经系统的胆碱能突触处，通过快速水解乙酰胆碱，有效终止突触传递过程，确保神经信号的精准调控。

乙酰胆碱酯酶具有极高的催化效率，每个酶分子每秒可降解约5000个乙酰胆碱分子。此外，该酶也存在于红细胞膜表面，构成Yt血型抗原系统。在自然界中，乙酰胆碱酯酶存在多种分子形式，这些形式在催化活性上相似，但在寡聚体组装方式及细胞表面锚定模式上存在差异。

由艾美捷代理AAT Bioquest推出的Amplite® 比色法乙酰胆碱酯酶检测试剂盒，货号：AAT-11400，提供了一种便捷的AChE活性检测方案。其检测原理为：AChE催化乙酰硫代胆碱水解生成硫代胆碱，硫代胆碱与DTNB（5,5′-二硫代双(2-硝基苯甲酸)）反应生成具有特征吸收峰的加合物。该加合物的吸光度强度与硫代胆碱的生成量成正比，从而可定量反映AChE的酶活性水平。

二、试剂盒组分与储存条件

使用前请将所有组分置于室温条件下解冻。未使用的储备液建议分装为单次用量，于-20°C保存，避免反复冻融。

三、储备液配制方法

1. DTNB储备液（20×）

向DTNB组分（Component A）瓶中加入0.6 mL检测缓冲液（Component B），充分混合，即得20× DTNB储备液。注意避光保存。

> 注：DTNB溶解较为缓慢，溶液呈现微浊状态属于正常现象。实验时可取用上清液或直接使用混合液。

2. 乙酰硫代胆碱储备液（20×）

向乙酰硫代胆碱组分（Component C）瓶中加入0.6 mL去离子水，充分混合，即得20× 乙酰硫代胆碱储备液。

3. 乙酰胆碱酯酶标准品溶液（50 U/mL）

向乙酰胆碱酯酶标准品（Component D）瓶中加入100 μL含0.1% BSA的去离子水，充分溶解，即得50 U/mL的AChE标准品溶液。

四、标准品稀释方案

取20 μL 50 U/mL的AChE标准品溶液，加入980 μL检测缓冲液（Component B），混匀，得到1000 mU/mL的标准品溶液（编号AS7）。随后取AS7，以检测缓冲液为稀释液，进行1:3倍比梯度稀释，分别得到AS6至AS1系列浓度梯度的标准品。

> 注：稀释后的AChE标准品溶液稳定性较差，建议在配制后4小时内使用完毕。

五、工作液配制

取250 μL 20× DTNB储备液和250 μL 20× 乙酰硫代胆碱储备液，加入4.5 mL检测缓冲液（Component B）中，充分混匀，定容至总体积5 mL，即得AChE工作液。该工作液需注意避光保存。

六、实验操作流程

1. 向检测孔中加入50 μL AChE工作液；

2. 分别加入50 μL AChE标准品或待测样品；

3. 室温条件下孵育10～30分钟；

4. 使用吸光度酶标仪，在410 ± 5 nm波长处读取吸光度值。

七、关键实验参数

检测仪器：吸光度微孔板酶标仪

检测波长：410 ± 5 nm

推荐板型：透明底微孔板

八、注意事项

1. 工作液及DTNB储备液需注意避光保存，避免光照导致试剂降解；

2. DTNB溶解后出现轻微浑浊属正常现象，不影响检测结果；

3. 稀释后的标准品溶液稳定性较差，应现配现用，于4小时内完成检测；

4. 建议每个浓度标准品及待测样品设置复孔，以保证数据的准确性和可重复性；

5. 实验操作中请使用无酶枪头和洁净容器，避免外源酶污染对结果产生干扰。

本试剂盒操作简便、灵敏度高，适用于AChE活性的快速定量检测，可广泛应用于神经生物学研究、药物筛选及酶动力学分析等领域。