武汉艾美捷科技有限公司

一、产品概述

ReadiUse™ 预活化HRP NHS酯是辣根过氧化物酶（HRP）的单NHS酯衍生物，专为含伯胺基团的生物分子如抗体，蛋白等提供简便高效的偶联方案。ReadiUse™ 预活化HRP NHS酯由艾美捷代理AAT Bioquest推出，货号：AAT-11025，已预先完成活化处理，用户无需自行进行酶活化或复杂的化学修饰步骤，仅需简单混合即可完成抗体与HRP的共价偶联。

二、核心性能优势

操作极简：将抗体碱性溶液（pH 8.5-9.0）直接与HRP NHS酯混合，室温振荡孵育1-2小时即可完成偶联反应。无需透析，脱盐或春华步骤，反应液大多可直接用于elisa检测。

适用浓度范围宽：任何浓度高于1 mg/mL的抗体均可直接与预活化HRP NHS酯进行偶联，无需预先调整浓度。

结果可靠：该方法提供了最稳定的抗体-HRP偶联途径，批次间差异小，有效避免了传统偶联方法中活化效率不稳定导致的标记效果波动。

三、操作流程

3.1 标准偶联步骤

1. 取约100 μg抗体（IgG），溶于20 ~ 50 μL 25 mM碳酸氢钠缓冲液（pH 8.5）中；

2. 将抗体溶液转移至HRP NHS酯小管中，充分混匀；

3. 室温反应1 ~ 2小时，建议伴随轻柔振荡；

4. 加入等体积100 mM Tris-HCl缓冲液（pH 7.5）+ 0.5% BSA，终止反应；

5. 反应混合物于4℃保存，即可直接用于后续实验。

3.2 注意事项

干扰因素 | 处理方式

叠氮化钠（NaN₃） | 需提前去除，否则会抑制HRP活性

Tris缓冲液及其他含胺化合物 | 需更换为不含胺的缓冲体系，否则竞争消耗NHS酯

样品中其他蛋白（如BSA） | 需预先纯化目标蛋白，避免竞争标记

四、应用建议与质量保证

直接使用场景：大多数情况下，反应结束后加入含BSA的终止缓冲液即可直接用于elisa检测，无需进一步纯化。BSA在此处既作为封闭蛋白减少非特异性结合，也起到稳定HRP-抗体偶联物的作用。

产品合规说明：本产品仅供研究使用，不得用于临床诊断。操作过程中如需处理潜在危险化学品，请查阅产品附带的安全数据表（SDS）。未经AAT Bioquest书面许可，严禁对试剂盒或其组分进行化学分析或反向工程。

五、常见问题与解决方案

1、标记效率低→确认抗体浓度是否≥1mg/mL；检测缓冲液中是否含Tris，甘氨酸等胺类化合物，确保无叠氮钠存在。

2、elisa背景高→检查密封条件是否充分，适量增加BSA浓度或延长封闭时间。

3、偶联物活性下降→避免反复冻融，建议分装后于4℃短期保存或加入等量甘油于-20℃长期保存。

六、总结

ReadiUse™ 预活化HRP NHS酯以即用型预活化设计为核心优势，将抗体-HRP偶联从多步复杂操作简化为一步混合反应。无需纯化步骤即可获得直接用于elisa的偶联产物，大幅节约了实验时间和操作成本。对于需要批间一致性的常规免疫检测或高通量筛选项目，该产品提供了一套可靠，高效的标准化偶联解决方案。