武汉艾美捷科技有限公司

一、标记技术路径概述

寡核苷酸的荧光标记根据检测需求存在多种方案。对于5'端标记，行业通用方案包括基于-羧基荧光素单一异构体的5'-荧光素亚磷酰胺，以及两种氯代衍生物——5'-六氯荧光素亚磷酰胺（HEX）和5'-四氯荧光素亚磷酰胺（TET），均可实现高效偶联。若需标记3'端，则采用3'-荧光素CPG固相载体。无论采用上述哪种标记方式，后续均使用标准氢氧化铵裂解与脱保护条件下即可释放荧光素标记的寡核苷酸产物，无需额外操作步骤。

二、产品关键参数

由艾美捷代理AAT Bioquest推出的6-TET 亚磷酰胺 [5'-四氯荧光素亚磷酰胺]，货号：AAT-6025，参数如下：

参数 | 规格

外观 | 白色固体

分子量 | 981.72

溶解性 | 可溶于乙腈

激发波长 | 521 nm

发射波长 | 542 nm

储存条件 | 冷冻（<-15℃），严格避光

有效期 | 收货后6个月

三、光谱特性与多重检测应用

TET标记物的激发峰位于521 nm，发射峰位于542 nm，处于荧光素的黄绿色光谱区，与HEX（激发533 nm/发射559 nm）相比，TET光谱位置蓝移约12-17 nm，两者光谱重叠度有限，适合在同一反应体系内作为独立检测通道使用。在毛细管电泳或实时荧光PCR平台中，TET常用于STR基因分型或多重探针检测体系中的特定靶标通道。

四、操作要点与储存注意事项

合成操作遵循标准固相合成流程，在终循环偶联步骤中加入TET亚磷酰胺，后续氧化，盖帽以及氨水脱保护条件无需调整。产品收货后应立即存放于-15℃以下环境，配制未乙腈溶液后建议分装单次用量，避免反复冻融及光暴露引发的荧光性能衰减。稀释后的工作液建议即配即用，不宜长期存放。

文献参考：

Sequence-specific, self-reporting hairpin inversion probes

Authors: Browne KA., undefined

Journal: J Am Chem Soc (2005): 1989

Modified oligonucleotides containing lithocholic acid in their backbones: their enhanced cellular uptake and their mimicking of hairpin structures

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Synthesis of HyBeacons and dual-labelled probes containing 2'-fluorescent groups for use in genetic analysis

Authors: Dobson N, McDowell DG, French DJ, Brown LJ, Mellor JM, Brown T.

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Reduced aggregation and improved specificity of G-rich oligodeoxyribonucleotides containing pyrazolo[3,4-d]pyrimidine guanine bases

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Journal: Nucleic Acids Res (2002): 4952

Diels--Alder bioconjugation of diene-modified oligonucleotides

Authors: Hill KW, Taunton-Rigby J, Carter JD, Kropp E, Vagle K, Pieken W, McGee DP, Husar GM, Leuck M, Anziano DJ, Sebesta DP.

Journal: J Org Chem (2001): 5352