武汉艾美捷科技有限公司

一、标记策略概述

寡核苷酸的荧光素标记有多种技术路径可供选择。具体方案取决于实验对荧光光谱特性的要求。针对5'端标记，可使用三种CE亚磷酰胺单体：源于单一异构体6-羧基荧光素的5'-荧光素亚磷酰胺、5'-六氯荧光素亚磷酰胺（HEX）以及5'-四氯荧光素亚磷酰胺（TET）。对于3'端标记，则采用3'-荧光素CPG固相载体。上述所有标记方式均可在标准氨水裂解与脱保护条件下释放荧光素标记的寡核苷酸产物。

二、产品关键参数

由艾美捷代理AAT Bioquest推出的6-HEX 亚磷酰胺（5'-六氯荧光素亚磷酰胺），货号：AAT-6024，参数如下：

参数 | 规格

外观 | 白色固体

分子量 | 1050.61

溶解性 | 可溶于乙腈

激发波长 | 533 nm

发射波长 | 559 nm

储存条件 | 冷冻（<-15℃），避光

有效期 | 收货后6个月

三、光谱特性与应用选择

HEX标记物的激发峰位于533 nm，发射峰位于559 nm，处于荧光素的黄绿色光谱区域。根据多重检测需求，三种荧光素标记物在洗手和发射波长上村子啊细微偏倚，可在同一反应体系内实现多目标区分检测。

四、操作要点与注意事项

标记反应遵循标准固相合成流程，5'端标记使用亚磷酰胺单体在终循环偶联步骤加入，3'端标记则从CPG载体起始合成。氨水处理条件与未修饰寡核苷酸相同，无需额外步骤。产品应严格避光保存于-15℃以下，溶解于乙腈后建议尽快使用，避免反复冻融及光照引起荧光淬灭。

文献参考：

Sequence-specific, self-reporting hairpin inversion probes

Authors: Browne KA., undefined

Journal: J Am Chem Soc (2005): 1989

Modified oligonucleotides containing lithocholic acid in their backbones: their enhanced cellular uptake and their mimicking of hairpin structures

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Reduced aggregation and improved specificity of G-rich oligodeoxyribonucleotides containing pyrazolo[3,4-d]pyrimidine guanine bases

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Diels--Alder bioconjugation of diene-modified oligonucleotides

Authors: Hill KW, Taunton-Rigby J, Carter JD, Kropp E, Vagle K, Pieken W, McGee DP, Husar GM, Leuck M, Anziano DJ, Sebesta DP.

Journal: J Org Chem (2001): 5352