武汉艾美捷科技有限公司

一、产品概述

本产品由艾美捷Bethyl Laboratories推出，是一款针对人Cry1蛋白的高亲和力兔多克隆抗体（货号 A302-614A），经抗原亲和纯化制备。该抗体适用于免疫沉淀（IP）及蛋白质印迹（WB）检测，仅供研究使用。

Cry1（Cryptochrome 1）是生物钟负反馈调控回路中的蓝光依赖性核心调节因子。它与Cry2协同作用，抑制CLOCK|NPAS2-ARNTL复合物介导的E盒依赖性转录，从而维持昼夜节律的周期长度与稳定性。与植物和细菌中的光裂解酶同源物不同，哺乳动物Cry1不具有光裂解酶活性，但其能够将PER蛋白等昼夜节律核心蛋白转运至细胞核，完成转录抑制。CRY1基因突变与睡眠相位延迟综合征（DSPD）等昼夜节律紊乱疾病密切相关，同时也在癌症、代谢疾病及免疫调节中发挥重要作用。

二、产品规格

参数 详细信息

靶标 Cry1

反应种属 人

应用 IP， WB

宿主 兔

克隆性 多克隆

形式 完整IgG

免疫原 位于第536位至C末端之间

同种型 IgG

偶联物 未偶联

纯度 抗原亲和纯化

抗原种属 人

浓度 200 µg/mL

缓冲液 Tris缓冲盐水，含0.1% BSA及0.09%叠氮化钠

储存条件 2–8°C

有效期 自收货之日起1年

三、靶标详细信息

3.1 别名

cryptochrome 1 (photolyase-like)， cryptochrome circadian clock 1， DSPD， PHLL1。

3.2 功能背景

Cry1是哺乳动物昼夜节律系统的核心组分，其功能机制如下：

转录抑制作用：在细胞核内，Cry1与Cry2形成复合物，直接结合CLOCK-BMAL1异二聚体，抑制其介导的Per和Cry自身基因的转录激活，形成约24小时的负反馈回路。

核转运功能：Cry1与PER蛋白相互作用，促进PER蛋白从细胞质转入细胞核，这是维持周期长度所必需的步骤。

蓝光感应（非哺乳动物）：在低等生物中，Cry作为蓝光受体；但在哺乳动物中，Cry1的光感应功能已退化，主要作为转录抑制因子发挥作用。

疾病相关性：CRY1基因的功能获得性突变与家族性睡眠相位延迟综合征（DSPD）相关；此外，Cry1在多种癌症中表达异常，影响肿瘤细胞增殖及化疗敏感性。

四、抗体制备与纯化

4.1 免疫原及表位定位

本抗体采用的免疫原对应人Cry1蛋白序列中第536位至C末端之间的区域。经精确定位，A302-614A所识别的表位位于第536–586氨基酸区间（参考序列NP_004066.1）。该区域位于C端功能域，具有较高的抗原特异性，避免了与Cry2或其他含光裂解酶结构域蛋白的交叉反应。

4.2 纯化方法

抗体通过抗原亲和层析纯化。将针对Cry1 C端表位（第536–586位）的特异性多肽固定于固相载体，使抗血清中的特异性IgG结合于该表位，经洗脱获得高纯度抗体。此法确保最终产品中只保留识别目标表位的抗体分子，显著降低非特异性背景。

4.3 浓度测定

免疫球蛋白浓度采用比尔定律测定，以1 mg/mL IgG在280 nm下的吸光度（A280）为1.4作为标准。实测浓度为200 µg/mL。相较于部分抗体1 mg/mL的浓度，本抗体浓度较低，使用时需根据推荐稀释比例进行适当调整，避免因稀释过度导致信号减弱。

4.4 缓冲液与防腐剂

抗体储存于Tris缓冲盐水（TBS），含0.1%牛血清白蛋白（BSA）作为稳定剂，及0.09%叠氮化钠作为防腐剂。BSA可防止抗体在低浓度下吸附于管壁，保持其稳定性。注意：叠氮化钠有毒，操作时请佩戴防护手套。若用于需要叠氮化物敏感的细胞实验或动物注射，使用前应通过透析或超滤去除叠氮化钠。

五、储存与稳定性

收到产品后，请将抗体置于2–8°C条件下储存。切勿冷冻，反复冻融会导致抗体变性聚集、效价下降。在推荐的储存条件下，自收货之日起1年内可保持稳定。由于本抗体浓度较低（200 µg/mL），不建议再进行分装冻存（稀释后更易降解），应直接于2–8°C原管保存，每次取用后立即放回。

六、应用指南

以下推荐条件均经过实验验证，用户可根据具体实验体系进行优化。所有WB实验的封闭及抗体稀释均使用5%脱脂奶粉-TBST缓冲液，一抗孵育推荐4°C过夜。

6.1 蛋白质印迹（Western Blot， WB）

推荐稀释比：1:2000 – 1:10000

注意事项：由于抗体母液浓度为200 µg/mL，按1:2000稀释后工作浓度为0.1 µg/mL；按1:10000稀释后工作浓度为0.02 µg/mL。该范围经验证有效，但建议首次实验从1:2000开始，根据信号强度调整。

样本要求：人细胞裂解液（如HeLa、U2OS、HEK293）。Cry1蛋白分子量约66–70 kDa，使用常规10% SDS-PAGE凝胶即可有效分离。

转膜条件：常规湿转（100V，60–90分钟）或半干转，PVDF或NC膜均可。

6.2 免疫沉淀（Immunoprecipitation， IP）

推荐用量：每毫克细胞裂解液总蛋白使用6 µg抗体。

由于母液浓度200 µg/mL，取6 µg抗体体积为30 µL。对于1 mg总蛋白的裂解液，加入30 µL抗体原液。

6.3 跨种属反应性说明

本抗体仅经验证可识别人（human）Cry1。未测试小鼠、大鼠或其他种属。根据表位序列（第536–586位）与其他哺乳动物Cry1的比对，人鼠同源性约85%，可能存在交叉反应，但不保证有效。建议优先使用人样本。

参考文献（部分）：

Griffin EA Jr， et al. (1999) *Science* 286: 768–771.

Kume K， et al. (1999) *Cell* 98: 193–205.

Patke A， et al. (2017) *Cell* 169: 203–215.

注意：本产品仅限研究使用，不得用于诊断或治疗。用户应自行验证抗体在其特定实验体系中的适用性。以上信息覆盖了A302-614A抗体的全部规格、应用参数及背景知识，使用者可据此快速建立实验方案，获得可靠且可重复的检测结果。