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脂质过氧化是动物和植物细胞损伤的一个明确机制。脂质过氧化物是细胞氧化应激的不稳定指标，它们会分解形成更复杂且更具反应性的化合物，例如异前列腺素。异前列腺素是一种通过氧自由基诱导组织磷脂和脂蛋白的过氧化而产生的非酶促合成的二十烷类化合物。异前列腺素是类似前列腺素的化合物，正常情况下会出现在血浆和尿液样本中，但在组织、血浆和尿液中，它们的水平会因氧化应激而升高。

 

8-异前列腺素F2α（也称为8-表前列腺素F2α、8-异前列腺素或15-异前列腺素F2t）是一种已被证明可用于体内氧化应激评估的异前列腺素。它是由花生四烯酸衍生的非环氧化酶和环氧化酶过氧化途径在膜磷脂中产生的。8-异前列腺素F2α（8-iso-PGF2α）是一种强效的血管收缩剂，也是3T3细胞和血管平滑肌细胞中的诱变剂，可能是一种能够改变膜完整性的病理生理介质。它与动脉粥样硬化的形成有关，其水平升高与肝肾综合征、类风湿性关节炎、致癌作用以及动脉粥样硬化有关。8-iso-PGF2α在血浆中循环，并通过尿液排出。8-iso-PGF2α以酯化低密度脂蛋白磷脂和游离酸的形式循环。正常人血浆和尿液中的8-iso-PGF2α水平分别约为40-100 pg/mL和约190 pg/mg肌酐。测定总8-iso-PGF2α的方法通常需要对组织中的8-iso-PGF2α酯进行碱水解，随后进行提取、相分离和薄层色谱分析。

 

OxiSelect™ 8-异前列腺素F2α ELISA试剂盒是一种用于快速检测和定量8-iso-PGF2α的酶免疫分析方法。通过将样本中的8-iso-PGF2α吸光度与已知8-iso-PGF2α标准曲线的吸光度进行比较，来确定样本中8-iso-PGF2α的含量。每套试剂盒提供的试剂足以进行多达96次测定，包括标准曲线和未知样本的测定。

 

艾美捷OxiSelect 8-异前列腺素F2a ELISA试剂盒（#STA-337）测定原理：

Cell Biolabs的8-iso-PGF2α试剂盒是一种竞争性酶联免疫吸附测定（ELISA），用于测定血浆、尿液、血清或组织提取物等多种生物样本中的8-iso-PGF2α水平。将抗8-iso-PGF2α抗体在预先包被的微孔板孔中孵育。洗涤后，将8-iso-PGF2α标准品或处理过的样本与8-iso-PGF2α-HRP偶联物混合，并同时加入孔中。未偶联的（游离的）8-iso-PGF2α和8-iso-PGF2α-HRP偶联物会竞争性地与结合在板上的抗体结合。经过短暂孵育和洗涤后，加入HRP底物。HRP活性导致的颜色变化与结合到板上的8-iso-PGF2α偶联物的量成正比，与样本或标准品中游离8-iso-PGF2α的量成反比。通过与已知的标准曲线进行比较，确定未知样本中的8-iso-PGF2α含量。在进行测定之前，请仔细阅读完整的试剂盒说明书。

 

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OxiSelect 8-异前列腺素F2a ELISA试剂盒组成：

1. 山羊抗兔抗体包被板（编号250001）：一个96孔条板。  

2. 抗8-iso-PGF2α抗体（编号233701）：一个20微升装的抗8-iso-PGF2α兔IgG管。  

3. 样本稀释液（编号233702）：一个50毫升瓶。  

4. 中和液（编号233705）：一个20毫升瓶。  

5. 10倍洗涤缓冲液（编号310806）：一个100毫升瓶。  

6. 底物溶液（编号310807）：一个12毫升琥珀色瓶。  

7. 终止液（编号310808）：一个12毫升瓶。  

8. 8-iso-PGF2α标准品（编号233703）：一个25微升装的200微克/毫升8-iso-PGF2α（溶于DMSO）管。  

9. 8-iso-PGF2α-HRP偶联物（编号233704）：一个70微升装的8-iso-PGF2α-HRP偶联物管。

 

未提供的材料：

1. 蛋白质样本，如纯化蛋白、血浆、血清、细胞裂解液等。  

2. 去离子水。  

3. 样本提取和纯化所需的试剂和材料。

 

储存条件：

- 收到后，将抗8-iso-PGF2α抗体、8-iso-PGF2α-HRP偶联物和8-iso-PGF2α标准品储存于-20摄氏度。根据需要分装，以避免反复冻融。  

- 将试剂盒中的其他组分储存于4摄氏度。  

- 任何部分使用或未使用的组分应恢复到适当的储存温度。

 

样本准备：

为了测量游离和酯化的异前列腺素，需要对与脂蛋白或磷脂结合的8-异前列腺素F2α（8-iso-PGF2α）进行水解。为了水解这种酯键，通常用2N氢氧化钠在45摄氏度下处理样本2小时。

- 血清、血浆、组织裂解液样本：使用1份10N氢氧化钠处理4份液体样本。在45摄氏度下孵育2小时后，每500微升水解样本加入100微升浓（10N）盐酸。加入后样本可能会变浑浊。在微型离心机中以12,000转/分钟离心5分钟。清澈的上清液可用于测定，或储存于-20摄氏度或更低温度以备后用。在测定前，请确保每个中和后的样本pH值在6-8之间。如果不在该范围内，通过将100微升样本加入100微升提供的中和液中，将pH值调整到该范围内。  

- 尿液样本：在ELISA之前，需要对尿液样本进行酸水解，以分解将脂质和非脂质成分结合在一起的键。通过加入1/10体积的1N盐酸将尿液样本酸化至pH 3.0（例如：向1毫升尿液样本中加入100微升1N盐酸）。酸化后的尿液样本应在PBS或样本稀释液中进一步稀释1:4至1:8，然后进行ELISA。

 

结果示例：

以下图表展示了典型的8-iso-PGF2α结果。以下数据仅供参考，不应用于解释实际结果。  

图1：8-iso-PGF2α ELISA标准曲线  

图2：用8-iso-PGF2α ELISA检测的人尿液稀释液

 

OxiSelect 8-异前列腺素F2a ELISA试剂盒文献参考：

1. Banerjee, M., Kang, K.H., Morrow, J.D., et al. (1992) Am. J. Physiol. 263: H660-H663.

2. Morrow, J.D., Hill, K.E., Burk, R.F., et al. (1990) Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 87: 9383-9387.

3. Morrow, J.D., Harris, T.M., Roberts, L.J. (1990) Anal. Biochem. 184: 1-10.

4. Vacchiano, C.A., and Tempel, G.E. (1994) J. Appl. Physiol. 77: 2912-2917.

5. Wang, Z., Ciabattoni, G., Cre’minon, C., et al. (1995) Pharmacol. Exp. Ther. 275: 94-100.

 

https://www.amyjet.com/products/STA-337.shtml