武汉艾美捷科技有限公司

α-酮戊二酸（α-KG，或称2-氧代戊二酸）是一种在多种代谢途径中具有多种作用的重要分子。α-KG通过异柠檬酸脱氢酶催化异柠檬酸的氧化脱羧生成，同时也是通过谷氨酸脱氢酶催化谷氨酸脱氨基生成的酮酸产物。α-酮戊二酸在三羧酸（TCA）循环中作为细胞能量代谢的关键中间体发挥作用。通过谷氨酸脱氢酶从谷氨酸生成α-酮戊二酸的补充反应可以为循环补充燃料。

α-酮戊二酸作为一种氮运输分子，促进氨基酸合成，同时抑制肌肉中的蛋白质降解。L-丙氨酸或L-天冬氨酸可以通过转氨酶（如丙氨酸氨基转移酶（ALT）或天冬氨酸氨基转移酶（AST））与α-酮戊二酸反应生成谷氨酸，这是氮的利用和排泄的基础。氨基酸的氨基团附着在α-KG上，随后被运输到肝脏并进入尿素循环。这些转氨基和脱氨基途径对于氨的解毒以及神经递质谷氨酸和γ-氨基丁酸（GABA）的形成也非常重要。

α-酮戊二酸的其他特性包括通过清除过氧化氢积累并促进其消除发挥抗氧化活性。它还通过氧化脱羧生成ATP，为肠道细胞过程和氧化还原平衡提供能量。该分子还可以影响脯氨酸的羟基化，增加胶原蛋白和骨基质的形成。最近，α-KG被发现可以延长细胞寿命并延缓与年龄相关的疾病（见图1）。

图1：α-酮戊二酸对多种细胞功能的影响

 

艾美捷α-酮戊二酸测定试剂盒(比色法)（#MET-5131）是一种简单的比色法检测方法，可在96孔微量滴定板格式中测量血浆、血清、组织匀浆或细胞悬浮液中存在的α-酮戊二酸活性。每套试剂盒提供足够的试剂进行多达100次检测（包括空白、标准品和样本）。试剂盒的检测灵敏度下限约为3.9 µM α-酮戊二酸。

 

注意：样本中存在的丙酮酸可能会产生背景信号。如果您的测试样本中含有丙酮酸，请对每个样本进行两次检测。将一个样本反应与α-KG反应转换剂处理，另一个不处理（负对照反应混合物中将加入1X检测缓冲液代替α-KG反应转换剂）。α-酮戊二酸的浓度通过两个孔的吸光度（OD）读数差异计算得出。

 

α-酮戊二酸测定试剂盒(比色法)检测原理：

Cell Biolabs的α-酮戊二酸检测试剂盒通过偶联酶促反应测量α-酮戊二酸。α-酮戊二酸通过转氨基作用生成丙酮酸，随后通过比色探针检测丙酮酸。样本和标准品孵育60-120分钟后，使用标准96孔酶标仪（540-570 nm）读取结果。样本与96孔微量滴定板格式中的已知浓度α-酮戊二酸标准品进行比较。

 

α-酮戊二酸测定试剂盒(比色法)相关产品：

1. MET-5012：乳酸检测试剂盒（比色法）

2. MET-5022：糖原检测试剂盒（比色法）

3. MET-5054：L-氨基酸检测试剂盒（比色法）

4. MET-5088：谷氨酸检测试剂盒（比色法）

5. MET-5123：丙氨酸氨基转移酶（ALT）活性检测试剂盒（比色法）

 

试剂盒组成：

盒子1（蓝色冰袋运输）：

1. α-KG反应转换剂（部件编号51323C）：两支500 µL试管。

2. α-酮戊二酸标准品（部件编号51321C）：一支100 µL试管，100 mM溶液。

3. α-KG酶混合物（部件编号51324C）：两支100 µL琥珀色试管。

4. 比色探针（部件编号51231C）：两支100 µL琥珀色试管。

5. HRP（部件编号234402）：一支100 µL试管，含100 U/mL的甘油溶液。

 

盒子2（蓝色冰袋运输）：

1. 10倍检测缓冲液（部件编号50292A）：一瓶25 mL。

2. α-KG底物混合物（部件编号51322B）：两支500 µL试管。

 

未提供材料：

1. 蒸馏水或去离子水。

2. 10 kDa截留分子量离心过滤器（例如Amicon Ultra 0.5 mL）（可选，用于高蛋白含量样本）。

3. 1倍PBS。

4. 标准96孔微量滴定板。

 

储存：

收货后，将α-KG底物混合物和10倍检测缓冲液储存于4°C。其余组分储存于-20°C。

 

检测步骤：

每次检测时，每个α-酮戊二酸标准品、对照品和样本均需进行双份或三份检测，并使用新制备的标准曲线。

注意：样本中存在的丙酮酸可能会产生背景信号。如果您的测试样本中含有丙酮酸，请对每个样本进行两次检测。将一个样本反应与α-KG反应转换剂处理，另一个不处理（负对照反应混合物中将加入1X检测缓冲液代替α-KG反应转换剂）。α-酮戊二酸的浓度通过两个孔的吸光度（OD）读数差异计算得出。

1. 向96孔微量滴定板的每个孔中加入50 µL稀释后的α-酮戊二酸标准品、阳性对照或样本。

2. 向样本和一对样本孔的一半加入150 µL准备好的反应试剂，并充分混合孔内内容物。

3. 向剩余的一对样本孔的另一半加入150 µL准备好的阴性对照反应试剂，并充分混合孔内内容物。

4. 在37°C下避光孵育60-120分钟。

 注意：本检测为连续反应（未终止），因此可以在多个时间点进行测量以跟踪反应动力学。

5. 使用540-570 nm的酶标仪读取结果。

 

α-酮戊二酸测定试剂盒(比色法)文献参考：

1. Hammerqvist, F., et al. (1991) Surgery 109: 28-36.

2. He, L., et al. (2015) Curr. Protein Pept. Sci. 16: 576-581.

3. Hou, Y.Q., et al. (2010) Front Biosci. 16: 1186-1196.

4. Tatara M., et al. (2005) Poult. Sci. 84(10): 1604-1609.

5. Yao, K., et al. (2012) Amino Acids 42: 2491-2500.

 

https://www.amyjet.com/products/MET-5131.shtml