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Cayman的丙氨酸转氨酶（ALT）比色活性测定试剂盒提供了一种检测血清、血浆、组织样本和细胞裂解物中ALT活性的便捷方法。ALT活性的测量是通过监测使用乳酸脱氢酶（LDH）的偶联反应系统中NADH氧化的速率来进行的。NADH氧化为NAD+的同时，340nm处的吸光度降低。在ALT活性是限速的情况下，速率下降与样本中的ALT活性成正比。

需要但未提供：请下载试剂盒小册子，以验证此检测是否需要超纯水（Milli-Q或同等产品）或任何其他成分。

警告：本品不适用于人类或兽医。

测定方案：

艾美捷Cayman的丙氨酸转氨酶活性分析试剂盒（#700260-96），提供了一种方便的方法，用于检测血清、血浆、组织样本和细胞裂解液中的ALT活性。通过监测乳酸脱氢酶（LDH）耦联反应系统中NADH氧化的速率来测量ALT活性。NADH氧化成NAD*伴随着在340纳米处吸光度的降低。在ALT活性成为速率限制步骤的情况下，速率的降低与样本中的ALT活性直接成比例。

执行测定：

1. 阳性对照孔 - 在板中指定的孔中加入150μl的底物、20μl的辅因子和20μl的阳性对照。

2. 样本孔 - 在板中指定的孔中加入150μl的底物、20μl的辅因子和20μl的样本。

3. 覆盖板并在37℃下孵化15分钟。

4. 移除板盖，并迅速通过向所有使用的孔中加入20μl的ALT启动剂来启动反应。

5. 立即在37℃下每分钟测量一次340纳米处的吸光度，持续10分钟。如果ALT活性较低，继续读取长达60分钟。注意：背景孔（可选）- 在评估样本中的ALT活性时，背景活性通常不重要。然而，如果需要，可以为每个样本获得背景值。对于每个正在测定的样本，在板中指定的孔中加入150μl稀释的测定缓冲液（不含ALT底物）、20μl的样本、20μl的ALT辅因子和20μl的ALT启动剂。立即在37℃下每分钟测量一次340纳米处的吸光度，持续10分钟。如果ALT活性较低，继续读取长达60分钟。

图. 猪心丙氨酸转氨酶的活性

丙氨酸转氨酶活性分析试剂盒文献参考：

1.shiguro,M,Takio,K,Suzuki,M.,et al.Complete amino acidsequence of human liver cytosolic alanine aminotransferase(GPT)determined by a combination of conventional and mass spectral methods.Biochemistry 30,10451-10457(1991).

2.Yang,R.-Z.,Park,S,Reagan,WJ.,et al.Alanineaminotransferase isoenzymes:Molecularcloning and quantitative analysis of tissue expression in rats andserum elevation in liver toxicity.Hepatology 49,598-607(2009).

3.Erecinska,M.,Nelson,D,Nissim,I,et al.Cerebral alanine transportand alanine aminotransferase reaction:Alanine as a source of neuronalglutamate.J.Neurochem.62,1953-1964(1994)

4.Pratt,D.S.and Kaplan,M.M.Evaluation of abnormal liver-enzyme results inasymptomatic patients.N.Engl.J.Med.342(17),1266-1271(2000).

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7.Prati,D.,Taioli,E,Zanella,A,et al.Updated definitions of healthy ranges forserum alanine aminotransferase levels.Ann Intern Med.137,1-9(2002).

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