深圳市金赛途生物科技有限公司

首页 产品目录 产品目录(简版) 公司动态 企业认证 企业体检 联系我们

现货 | 3′-O-N3-dUTP作用机制解析:可逆终止核苷酸为何成为SBS测序核心底物?

发布人:深圳市金赛途生物科技有限公司

发布日期:2026/8/21 10:37:37

核苷酸类原料

3′-O-N3-dUTP


一、让DNA停下来,并不难

在DNA测序发展的早期,科学家很快意识到一个问题:如果聚合酶持续延伸 DNA链,测序系统就无法准确判断每一步究竟掺入了哪个碱基。

于是,一个简单而直接的思路诞生了:让DNA链在每次掺入后立即停止

Sanger测序所使用的ddNTP正是这一思想的经典代表。由于ddNTP缺乏3′-OH,一旦掺入即不可逆地终止延伸。然而,新的问题也随之出现:DNA虽然停下来了,却再也无法继续延伸。

对于需要数百次、数千次循环读取的高通量测序而言,单纯的“终止”远远不够。真正理想的状态应该是:

需要时能够精准终止
信号读取完成后能够温和恢复
恢复延伸后,不影响后续聚合,仍能保持天然DNA结构

于是,“可逆终止子(Reversible Terminator)”开始成为测序化学发展的重要方向。多种3′-OH封闭策略陆续被开发,包括3′-ONH₂、3′-O-Allyl(烯丙基)和 3′-O-Azidomethyl(叠氮甲基)等技术路线。


二、为什么是 3′-O-Azidomethyl?

对于可逆终止子而言,3′封闭基团需要同时满足几个苛刻的要求:能够有效阻断延伸、能够被温和条件去除、不影响聚合酶识别、去保护后无残留地恢复天然 DNA结构。然而,并非所有封闭基团都能兼顾聚合酶识别效率、终止效率、脱保护效率及后续延伸能力。

3′-O-Azidomethyl恰好在这些方面取得了良好的平衡:其叠氮甲基结构体积较小,对聚合酶的识别与掺入影响较小。同时,该保护基能够通过温和的还原条件被高效去除,恢复天然的3′-OH结构,不引入额外连接残基,从而顺利重新启动DNA链延伸。正因如此,3′-O-Azidomethyl已被广泛应用于商业化测序体系,成为可逆终止子设计中的经典方案之一。


三、3′-O-N3-dNTP 系列:经典可逆终止子成员

2400931-67-9.png

中文名:3ʹ-O-叠氮甲基三磷酸脱氧尿苷

英文名:3ʹ-O-Azidomethyl-dUTP

简  称:3ʹ-O-N3-dUTP

CAS号:2400931-67-9

分子式:C10H16N5O14P3

分子量:523.18

规  格:25 ul / 100 ul / 250 ul(支持定制包装)

形  态:水溶液

浓  度:100 mM

货  号:G09020005

为满足测序化学体系开发和核酸标记研究的高标准底物需求,金赛途推出了高品质、高纯度的 3′-O-叠氮甲基-dNTP系列产品。

该系列实现了A、C、G、T、U五种碱基的完整覆盖,便于在统一体系中开展方法开发与性能评估。

1. 3ʹ-O-Azidomethyl dATP(CAS: 1048021-78-8)
2. 3ʹ-O-Azidomethyl-dCTP(CAS: 1048021-94-8)
3. 3ʹ-O-Azidomethyl-dGTP(CAS: 1048022-06-5)
4. 3ʹ-O-Azidomethyl-dTTP(CAS: 1048021-85-7)
5. 3ʹ-O-Azidomethyl-dUTP(CAS: 2400931-67-9)

四、3′-O-N3-dUTP如何实现可逆终止?

3′-O-N3-dUTP最大的特点,在于其核糖3′位羟基被叠氮甲基暂时封闭。在聚合酶作用下,该核苷酸仍可被识别并掺入新生DNA链。但由于3′-OH被封闭,DNA链无法继续向下延伸。

此时:

1. 单个碱基完成掺入
2. 系统完成信号采集
3. 去除3′端封闭基团
4. 恢复天然3′-OH
5. 开启下一轮聚合反应

整个过程形成:

掺入 → 终止 → 检测 → 脱保护 → 再延伸

的循环机制。

研究表明,3′-O-Azidomethyl封闭基团可通过TCEP等温和还原条件去除,恢复天然DNA结构,为后续聚合反应提供延伸基础。与许多需要保留连接臂残基的修饰体系相比,该路线脱保护后无残留修饰,避免了在连续测序循环中逐步累积而影响反应效率。


五、3′-O-N3-dUTP的应用价值

1. NGS可逆终止测序

用于SBS测序体系开发,实现单碱基精确掺入和逐循环测序体系构建,为高通量测序提供底层化学支持。

2. 聚合酶兼容性研究

用于研究聚合酶对可逆终止核苷酸的识别、掺入和延伸能力,可作为新型测序酶开发的底物评估工具,典型用途涵盖:

聚合酶筛选
酶工程研究
底物兼容性评价
测序酶优化开发

帮助研发人员评估聚合酶对可逆终止核苷酸的识别和掺入能力。

3. 点击化学标记与探针设计

用于核酸后期修饰与标记,实现高选择性CuAAC反应和功能性探针高效开发,可用于核酸标记、探针构建及相关方法学研究。


六、为什么选择3′-O-N3-dUTP?

✅ 无痕还原,无修饰残留

去保护条件温和不伤链与酶,脱保护后不残留额外修饰结构,避免多轮循环中的修饰累积。

✅ 小分子封闭设计,提高聚合酶兼容性

叠氮甲基结构尺寸较小,有利于聚合酶识别与掺入,可作为高效的可逆终止底物参与测序反应。

✅ 特征性拉曼信号,降低背景干扰

叠氮基团在拉曼光谱中具有特征性信号峰,生物体系无内源性干扰,可实现低背景检测,适配SERS等非荧光测序方案。

✅ 系列齐全,配套供应

国产自研3′-O-N3-dNTP系列,覆盖不同碱基类型,支持现货供应与研发阶段的灵活选型。



扩展服务

精准终止,温和恢复,支撑循环测序每一步。

如需更多“核苷酸类原料”或定制包装服务,欢迎致电 13302967066!

金赛途生物专注于为基因测序、分子诊断与微生物检测提供可靠的国产化替代方案。

如需血球染料和缓冲盐等相关产品,可以在【迈盛生物官网】查阅完整的产品线与技术规格。


体外分子诊断 | 基因测序 | 微生物检测


END


gst_logo.jpg

深圳市金赛途生物科技有限公司

成立于2015年,是一家专注于微生物检测基因测序体外分子诊断等领域生化试剂原料研发、生产和销售的高科技企业。致力于提供高质量的生化试剂原料专业的定制合成服务,产品种类涵盖十余种类别,近千种创新产品。秉持客户至上、诚信专业的核心理念,用心服务,满足客户在科研和检测中的多元化需求。

金赛途微信公众号二维码
关注我们

获取最新产品动态

金赛途公众号:金赛途生物

金赛途官网:https://www.geneseqtools.com

咨询热线:0755-23251735

QQ2370561481

邮箱:sales@geneseqtools.com

相关新闻资讯

现货 | 从“总RNA”到“新生RNA”:5-Ethynyl-UTP标记技术解析

2026/08/18

核苷类原料5-Ethynyl-UTP在RNA研究领域,常常面临这样的疑问:细胞中到底在发生什么?虽然当前的测序技术已经能够精准测定细胞中“有哪些”RNA,但研究人员越来越发现:仅仅检测“总RNA”远远不够。因为,总RNA本质上是一个复杂的“混合体”,它同时包含了:● 已存在且稳定的RNA● 正在降解的RNA● 刚刚转录出来的新生RNA这三者混合在一起,使得一些关键的科研问题变得模糊不清:● 药物刺

推荐现货 | 核心原料:AMPPD冻干粉,构建高敏化学发光检测的关键一环

2026/08/11

碱性磷酸酶底物AMPPD在疾病诊断的微观战场上,碱性磷酸酶(ALP)如同精准的"生物信使",其活性波动暗藏肿瘤、传染病等关键病理信息。如何捕捉这些细微变化?AMPPD作为化学发光技术的核心原料,通过酶-底物特异性反应,将ALP的微弱信号转化为可测量的光子,这款底物能够实现精准而灵敏的检测,为您的研究提供可靠的数据支持。一、产品性质中文名: 碱性磷酸酶底物AMPPD,3-(2-螺旋金刚烷)-4-甲氧

现货 | 白细胞酯酶检测底物吡咯酯:尿液分析与IVD快速检测体系开发的关键原料

2026/08/07

发色底物Tos-Ala-OPPy尿路感染(UTI)是全球最常见的细菌感染之一,在中国,每年因尿路感染就诊的患者数以千万计。在门诊和基层医疗场景中,尿液分析试纸因其操作简便、结果即时,已成为尿路感染初筛的首选工具。在尿液分析试纸的众多检测项目中,白细胞(LEU)模块承担着判断尿液中是否存在白细胞的关键任务。该模块的检测原理基于白细胞酯酶(Leukocyte Esterase, LE)——一种主要存在