武汉艾美捷科技有限公司

在免疫学检测中，二抗的同型特异性与标记效率直接影响实验结果的灵敏度和数据可靠性。小鼠IgG1是血清中最丰富的IgG亚类，在单克隆抗体生产中亦占相当比例。由艾美捷代理Bethyl推出的一款辣根过氧化物酶（HRP）标记的羊抗鼠IgG1重链特异性二抗（货号：A90-105P），为相关实验体系提供规范化应用参考。

一、产品基本规格与标记特性

该二抗为羊源多克隆全分子IgG，采用HRP直接共价偶联，用户无需自行标记即可用于显色或化学发光检测。其关键质控指标如下：

1. 特异性与吸附工艺：抗血清经固相吸附处理以去除与其他小鼠免疫球蛋白亚类的交叉反应，再通过偶联鼠IgG1的琼脂糖凝胶柱进行亲和层析纯化。经免疫电泳和ELISA验证，该抗体与小鼠IgG1特异性结合，与小鼠IgA、IgM、IgG2a、IgG2b、IgG2c、IgG3及IgE的交叉反应率均低于1%，保证了检测靶标的专一性。

2. 酶标比与浓度：HRP与抗体的摩尔标记比为4:1，该比例旨在平衡酶活性与抗体结合活性之间的最优关系。抗体浓度为1 mg/mL（基于A280测定，1 mg/mL IgG对应吸光值1.4），便于精确计算每次实验的用量。

3. 保存体系与稳定性：储存于含0.2% BSA（稳定蛋白，减少管壁吸附）和0.05% Pro-Clean® 400（新型防腐剂，不含叠氮化物）的磷酸盐缓冲液（PBS）中。2-8°C条件下可稳定保存一年。关键提示：Pro-Clean 400为不含叠氮钠的防腐体系，因此该抗体可直接用于HRP检测体系，无需担忧叠氮化物对酶活性的抑制，使用前无需特殊处理。

二、推荐应用与稀释指南

该二抗覆盖ELISA、免疫细胞化学（ICC）、免疫组织化学（IHC）和蛋白质印迹（WB）四种常见平台。各应用的建议起始稀释范围如下：

应用 | 推荐稀释比例 | 适用场景说明

ELISA | 1:10,000 - 1:100,000 | 适用于直接或间接ELISA体系中检测小鼠IgG1型一抗或抗原捕获。高稀释度有利于降低背景信号。

Western Blot | 1:2,000 - 1:20,000 | 用于检测小鼠IgG1型一抗结合的靶蛋白。起始建议1:5,000，根据信号强度上下调整。

ICC / IHC | 1:200 - 1:2,000 | 细胞爬片（ICC）或组织切片（IHC）中检测小鼠IgG1型一抗。建议从1:500开始摸索。

稀释策略提示：不同样本的抗原丰度和一抗效价差异显著，建议初次实验时在推荐范围内设置2-3个稀释梯度（如WB设置1:5,000、1:10,000、1:20,000），选取背景最低且显色最强的条件作为工作浓度。

三、应用背景与重要注意事项

靶标亚类背景：小鼠IgG1是IgG四大亚类中含量最丰富者，具备穿过胎盘屏障、与Fc受体高效结合以及经典补体途径活化能力，在体液免疫应答和单克隆抗体研发中具有突出地位。

关键操作注意事项：

1. 亚类特异性局限：部分杂交瘤克隆可能表达异常的免疫球蛋白相关肽段，若目标单抗来源为杂交瘤上清，建议增设无关小鼠IgG1作为同型对照，以排除假阳性识别。

2. 二抗选择匹配：使用该抗体时，需确认一抗确为小鼠IgG1亚类。若一抗为小鼠IgG2a或IgM等其它亚型，该二抗无法有效识别，请选用对应亚类特异性的二抗。

3. 显色底物匹配：HRP的最佳底物体系包括TMB（ELISA显色）、DAB（IHC褐色沉淀）和ECL（WB化学发光）。根据下游检测平台选用对应的显色或发光试剂，并注意避光保存底物溶液。

4. 稀释液兼容性：该二抗含BSA，推荐使用含BSA或脱脂牛奶的缓冲液进行稀释，以维持抗体稳定并降低非特异性吸附。

四、总结

该款HRP标记的羊抗鼠IgG1特异性二抗凭借其低交叉反应率（<1%）、优化的4:1酶标比和不含叠氮化物的防腐体系，在ELISA、WB、ICC及IHC多种平台中均展现出良好的通用性。遵循推荐稀释区间（ELISA高达1:100,000，WB达1:20,000）和严谨的操作流程，可望获得高特异、低背景的检测结果，为小鼠IgG1型抗体相关的免疫检测体系提供稳定可靠的信号放大方案。