武汉恩玑生命科技有限公司

Knock down技术简介：

Knock down（KD，基因敲低）技术是一类借助分子手段降低目标基因表达水平的研究方法。该技术基于RNA干扰原理发挥作用，无需改变基因组DNA序列，仅通过降解目标基因转录出的mRNA实现下调对应蛋白的表达水平，进而实现对基因表达的调控。目前，该技术已被广泛应用于基因功能解析、药物靶点验证、疾病模型构建以及基因治疗的前期评估，是现代分子生物学与药物研发领域的核心工具之一。

Knock down技术原理：

目前Knock down技术有以下几种常见的转染方式：

① 直接根据目标基因的序列，设计并通过化学合成得到对应的双链siRNA，借助脂质体等手段直接递送到细胞内，siRNA与RNA诱导沉默复合体结合，通过碱基互补配对特异性识别目标基因的mRNA，促进mRNA降解或抑制其翻译过程，从而完成KD效果。

② 构建编码shRNA的质粒，通过慢病毒转染的方式整合在宿主细胞的基因组中，细胞内表达的shRNA经过加工，形成具有活性的siRNA，进而实现稳定的基因敲低或沉默效果。

③ CRISPRi：基于CRISPR-Cas9技术开发，使用失去DNA剪切能力的dCas9与目的基因结合，通过物理位置占据（物理性地阻碍RNA聚合酶与启动子的结合），干扰目的基因的转录，从而干扰目的基因的表达。不仅如此，dCas9还可以融合抑制基因表达的结构域，从而进一步加强KD的效果。

Knock down实验流程：

恩玑生命长期根植稳转细胞系的构建，在KD稳转细胞系的构建上使用基于shRNA载体的成熟RNAi技术，shRNA设计采用三保一策略，通过抗性或载体荧光严格筛选细胞，并通过PCR和WB双重验证敲低效率，确保获得长期有效、重复性强、敲低效率高的细胞系。

Knock down交付流程：

选择恩玑的优势：

经验丰富：恩玑生命长期从事稳转敲低细胞系的构建，积累了丰富的项目开发经验，并针对不同细胞开发了多种不同的载体递送方式。

细胞优良：恩玑生命细胞平台所有的细胞来源正规，种类广泛，覆盖多种不同的细胞系，人源细胞系均可提供STR验证。

多重验证：shRNA采用三保一策略，并同时提供PCR验证和WB全膜验证，确保敲低效率在60%以上。

赠送验证抗体：如果用来进行WB验证的抗体已经在恩玑生命官网上架，则该抗体同样可以免费提供20 μL供客户使用。

交付内容：

① 构建好的细胞株一瓶或者2支冻存株（包含空载对照）

② 电子版构建报告（包括PCR验证及WB全膜验证）

③ 20 μL验证使用的WB抗体（仅限恩玑官网上线的单克隆抗体）

注：非编码基因不包含WB验证和抗体

限于篇幅，更多产品详见官网：https://www.enkilife.cn