武汉艾美捷科技有限公司

一、产品概述

由艾美捷Bethyl Laboratories推出的兔源抗MED1（中介体复合物亚基1）多克隆抗体（货号：A300-793A），经抗原亲和纯化，特异性识别人类和小鼠MED1蛋白。抗体适用于免疫组织化学（IHC）、免疫沉淀（IP）和免疫印迹（WB），以未偶联（Unconjugated）的全IgG形式提供，浓度高达1000 µg/ml。产品保存于2–8°C，有效期自收货之日起为1年，原产于美国，适用于转录调控、核受体信号通路及RNA聚合酶II依赖性基因表达研究。

二、核心技术规格

参数项 | 具体规格

靶标 | MED1（中介体复合物亚基1）

反应种属 | 小鼠、人

适用实验 | IHC、IP、WB

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

抗体形式 | 全IgG

免疫原 | 人MED1蛋白1531位至C末端（1581位）区域

同种型 | IgG

偶联物 | 未偶联 |

纯度 | 抗原亲和纯化

抗原种属来源 | 人

浓度 | 1000 µg/ml

储存温度 | 2 – 8 °C

有效期 | 1年

缓冲液 | Tris-柠檬酸盐/磷酸盐缓冲液，pH 7–8，含0.09%叠氮化钠

表位信息：抗体识别的表位定位于人MED1蛋白第1525位至C末端（第1581位）之间的区域（参考序列NP_004765.2，GeneID 5469）。该C末端区域包含核受体相互作用结构域，远离中介体复合物的核心组装界面，确保免疫沉淀后仍可检测到完整的中介体复合物。

三、产品制备与质量控制

3.1 纯化工艺

抗体采用抗原亲和纯化：将对应人MED1蛋白C末端区域（1525–1581位）的合成多肽或重组蛋白片段共价固定于固相支持物上，使兔免疫血清过柱，特异性IgG被吸附；经充分洗涤去除未结合蛋白后，以低pH缓冲液洗脱目标抗体，随后中和、透析并置换至含防腐剂的缓冲液中。

3.2 浓度测定

免疫球蛋白浓度通过比尔-朗伯定律确定：1 mg/ml纯化IgG在280 nm波长处的吸光度（A280）为1.4。本产品批次实测A280值经换算确保浓度为1000 µg/ml，批间一致性高。

3.3 纯度与特异性验证

抗原亲和纯化工艺可有效去除兔血清中的非特异性IgG及其他血清蛋白。经SDS-PAGE和考马斯亮蓝染色评估，抗体纯度典型值≥95%。功能性特异性通过以下方式验证：

在MED1敲除细胞裂解物中WB检测无信号

过表达MED1的细胞中信号显著增强

免疫沉淀后质谱鉴定确认仅富集MED1及其已知相互作用伙伴（如核受体、中介体复合物亚基）

四、推荐应用与稀释方案

以下用量和稀释范围为推荐起始值。由于不同实验体系存在差异，用户需根据预实验结果进行优化。

4.1 免疫印迹（Western Blot，WB）

推荐稀释范围：1:2,000 – 1:10,000

封闭与抗体稀释液：含5%脱脂奶粉的TBST（Tris缓冲盐+0.1% Tween-20）

一抗孵育条件：4°C 过夜（推荐）

推荐二抗：山羊抗兔IgG（重链+轻链）抗体，货号A120-101P

特殊注意事项：当对免疫沉淀产物进行WB检测时，建议使用抗兔IgG轻链HRP偶联抗体（轻链特异性），并在封闭缓冲液中加入5%正常猪血清（货号S100-020），以避免重链交叉反应干扰。

阳性对照：HeLa、HEK293T或小鼠肝组织裂解液。MED1在多种细胞系中普遍表达，分子量约为220 kDa（MED1因高度磷酸化在SDS-PAGE中实际表观分子量约为200–220 kDa，与理论值1581个氨基酸~170 kDa有差异）。

操作提示：MED1分子量较大（>200 kDa），建议使用6–8% SDS-PAGE凝胶以提高大分子量蛋白的分离效果。转膜推荐使用0.45 µm PVDF膜，采用湿转法（100 V，2小时或4°C过夜转膜），并在转移缓冲液中添加0.01% SDS以促进大蛋白迁移。

4.2 免疫沉淀（Immunoprecipitation，IP）

推荐用量：6 µg 抗体 / mg 细胞裂解液总蛋白

裂解液选择：推荐使用温和非变性裂解液（如含150 mM NaCl、0.5% NP-40、50 mM Tris-HCl pH 7.4、蛋白酶抑制剂混合物）。为避免MED1降解，需添加广谱蛋白酶抑制剂（如PMSF、亮抑肽酶、胃蛋白酶抑制剂）。MED1是磷酸化蛋白，建议额外添加磷酸酶抑制剂（如正钒酸钠、β-甘油磷酸酯）。

孵育条件：裂解液与抗体4°C旋转孵育2–4小时或过夜，随后加入Protein A琼脂糖珠继续孵育1–2小时。

洗脱：可采用SDS-PAGE上样缓冲液煮沸5分钟洗脱，或使用低pH甘氨酸缓冲液进行非变性洗脱。

阴性对照：使用同种型兔IgG（非免疫IgG）进行平行沉淀，以评估非特异性背景。

注意：因MED1是中介体复合物的核心亚基，免疫沉淀可同时富集整个中介体复合物（约25个亚基）。建议使用温和洗涤条件（如含150 mM NaCl的裂解液洗涤3–4次）以维持复合物完整性。

4.3 免疫组织化学（Immunohistochemistry，IHC）

推荐稀释范围：1:1,000 – 1:5,000

抗原修复：推荐使用柠檬酸盐缓冲液（10 mM，pH 6.0）进行热诱导抗原修复（微波或高压）

样本类型：福尔马林固定、石蜡包埋（FFPE）组织切片

检测系统：推荐使用聚合物标记的HRP二抗系统

阳性对照组织：人乳腺癌组织、前列腺癌组织或小鼠肝组织。MED1在增殖活跃的细胞核中呈强阳性。

IHC操作提示：MED1定位于细胞核，染色呈弥散或斑点状分布。建议在封闭步骤中使用5%正常山羊血清阻断非特异性结合。一抗4°C孵育过夜可获得最佳信噪比。