武汉艾美捷科技有限公司

一、产品概述

由艾美捷Bethyl Laboratories推出的兔源抗Menin多克隆抗体（货号：A300-105A），经抗原亲和纯化，特异性识别人类Menin蛋白（多发性内分泌肿瘤1型蛋白）。抗体适用于免疫组织化学（IHC）、免疫沉淀（IP）和免疫印迹（WB），反应种属涵盖小鼠（Mouse）和人（Human）。抗体以未偶联（Unconjugated）的全IgG形式提供，浓度高达1000 µg/ml，保存于2–8°C条件下，有效期自收货之日起为1年。产品原产于美国。

二、核心技术规格

参数项 | 具体规格

靶标 | Menin

反应种属 | 小鼠、人

适用实验 | IHC、IP、WB

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

抗体形式 | 全IgG

免疫原 | 人Menin蛋白560位至C末端区域

同种型 | IgG

偶联物 | 未偶联

纯度 | 抗原亲和纯化

抗原种属来源 | 人

浓度 | 1000 µg/ml

储存温度 | 2 – 8 °C

有效期 | 1年

缓冲液 | Tris-柠檬酸盐/磷酸盐缓冲液，pH 7–8，含0.09%叠氮化钠

表位信息：抗体识别的表位定位于人Menin蛋白第575位至C末端（第615位）之间的区域（参考序列NP_000235.2，GeneID 4221）。该区域远离Menin与JunD、MLL复合物等主要相互作用界面，确保免疫沉淀后仍可检测到多种结合伙伴。

三、产品制备与质量控制

3.1 纯化工艺

抗体采用抗原亲和纯化：将对应Menin C末端区域的特异性表位多肽或重组蛋白片段共价固定于固相支持物上，使兔免疫血清过柱，特异性IgG被吸附；经充分洗涤去除未结合蛋白后，以低pH缓冲液洗脱目标抗体，随后中和、透析并置换至含防腐剂的缓冲液中。

3.2 浓度测定

免疫球蛋白浓度通过比尔-朗伯定律确定：1 mg/ml纯化IgG在280 nm波长处的吸光度（A280）为1.4。本产品批次实测A280值经换算确保浓度为1000 µg/ml，批间一致性高。

3.3 纯度与特异性验证

抗原亲和纯化工艺可有效去除兔血清中的非特异性IgG及其他血清蛋白。经SDS-PAGE和考马斯亮蓝染色评估，抗体纯度典型值≥95%。功能性特异性通过以下方式验证：

在Menin敲除细胞裂解物中WB检测无信号

过表达Menin的细胞中信号显著增强

免疫沉淀后质谱鉴定确认仅富集Menin及其已知相互作用蛋白

四、推荐应用与稀释方案

以下稀释及用量为推荐起始值。由于不同实验体系存在差异，用户需根据预实验结果进行优化。

4.1 免疫印迹（Western Blot，WB）

推荐稀释范围：1:10,000 – 1:25,000

封闭与抗体稀释液：含5%脱脂奶粉的TBST（Tris缓冲盐+0.1% Tween-20）

一抗孵育条件：4°C 过夜（推荐）或室温2小时

推荐二抗：山羊抗兔IgG（重链+轻链）抗体，货号A120-101P

特殊注意事项：当对免疫沉淀产物进行WB检测时，建议使用抗兔IgG轻链HRP偶联抗体（如轻链特异性二抗），并在封闭缓冲液中加入5%正常猪血清（货号S100-020），以避免重链交叉反应干扰目标蛋白信号（Menin分子量约68 kDa，与兔IgG重链55 kDa接近，常规抗H+L二抗会产生重链干扰）。

阳性对照：HeLa、HEK293T或小鼠胰腺MIN6细胞裂解液。Menin在多种细胞系中普遍表达，但在某些造血细胞系中水平较低。

4.2 免疫沉淀（Immunoprecipitation，IP）

推荐用量：6 µg 抗体 / mg 细胞裂解液总蛋白

裂解液选择：推荐使用温和非变性裂解液（如含150 mM NaCl、1% NP-40、50 mM Tris-HCl pH 7.4、蛋白酶抑制剂混合物）。避免使用高浓度SDS或强变性剂。

孵育条件：裂解液与抗体4°C旋转孵育2–4小时或过夜，随后加入Protein A/G琼脂糖珠继续孵育1–2小时。

洗脱：可采用SDS-PAGE上样缓冲液煮沸5分钟洗脱，或使用低pH甘氨酸缓冲液进行非变性洗脱。

阴性对照：使用同种型兔IgG（非免疫IgG）进行平行沉淀，以评估非特异性背景。

4.3 免疫组织化学（Immunohistochemistry，IHC）

推荐稀释范围：1:500 – 1:2,000

抗原修复：推荐使用柠檬酸盐缓冲液（10 mM，pH 6.0）进行热诱导抗原修复（微波或高压）

样本类型：福尔马林固定、石蜡包埋（FFPE）组织切片

检测系统：推荐使用聚合物标记的HRP二抗系统或生物素-链霉亲和素-HRP系统

阳性对照组织：正常人胰腺、甲状旁腺或垂体组织（MEN1相关内分泌器官）。小鼠胚胎组织（E14.5–E16.5）亦呈强阳性。

IHC操作提示：Menin定位于细胞核，部分细胞（如胰岛β细胞）可能出现胞浆弱染色。建议在封闭步骤中使用5%正常山羊血清阻断非特异性结合。一抗4°C孵育过夜可获得最佳信噪比。

五、实验注意事项

1. 叠氮化钠的影响：抗体缓冲液含0.09%叠氮化钠，该浓度可有效防腐。但若计划将本抗体直接标记HRP，需在标记前通过透析或凝胶过滤去除叠氮化钠（它会抑制HRP活性）。对于常规WB检测，叠氮化钠在洗涤步骤中被移除，无影响。

2. 免疫沉淀后WB的重链干扰问题：Menin的分子量约为68 kDa，与兔IgG重链（55 kDa）较为接近。若使用常规抗兔IgG（H+L）二抗检测IP产物，会同时识别沉淀抗体的重链和轻链，在68 kDa附近可能出现重链非特异条带干扰。强烈建议：对IP样本进行WB时，使用抗兔IgG轻链特异性HRP二抗（仅识别约25 kDa轻链），并在封闭缓冲液中添加5%正常猪血清以进一步降低背景。

3. 阳性对照的必要性：由于Menin在部分细胞系中表达水平较低（如某些淋巴细胞系），建议每次实验均设置已知高表达对照（如HEK293T、HeLa、MIN6），以验证抗体活性和实验操作。

4. 储存稳定性：抗体于2–8°C运输和保存，请勿冷冻。反复冻融会导致抗体聚集和活性下降。若需长期保存，可分装后置于-80°C，但应避免反复冻融。