武汉艾美捷科技有限公司

一、产品概述

山羊抗兔IgG多克隆抗体（货号：A120-101P）由艾美捷Bethyl Laboratories推出，特异性识别兔免疫球蛋白G（IgG）的重链和轻链（Heavy and Light Chain，H+L）。抗体经抗原亲和纯化，以未偶联（Unconjugated）的全IgG形式提供，浓度标准化为1 mg/ml。该抗体适用于酶联免疫吸附测定（ELISA）、免疫细胞化学（ICC）、免疫组织化学（IHC）和免疫印迹（WB）等多种检测平台，可作为兔源一抗的通用型二抗检测试剂，亦可用于直接包被ELISA板捕获兔IgG。产品原产于美国，2–8°C储存条件下有效期长达2年（自收货之日起计算），具有良好的实验室库存稳定性。

二、核心技术规格

参数项 | 具体规格

靶标 | 兔IgG（重链和轻链）

反应种属 | 兔

适用实验 | ELISA、ICC、IHC、WB

宿主 | 山羊

克隆性 | 多克隆

抗体形式 | 全IgG

同种型 | 山羊IgG

偶联物 | 未偶联

纯度 | 抗原亲和纯化

抗原种属来源 | 兔

浓度 | 1 mg/ml

储存温度 | 2 – 8 °C

有效期 | 2年

缓冲液 | 磷酸盐缓冲液（PBS），含0.09%叠氮化钠

特异性说明：通过免疫电泳和ELISA验证，本抗体与兔IgG重链以及兔其他免疫球蛋白（IgA、IgM等）共有的轻链均有反应。未检测到针对非免疫球蛋白血清蛋白的抗体。该抗体可能与其他物种的IgG发生交叉反应（详见下文）。

三、产品制备与质量控制

3.1 纯化工艺

抗体采用亲和层析法制备：将兔IgG抗原共价偶联至琼脂糖凝胶珠上，装柱后使山羊抗血清过柱，特异性IgG被吸附；充分洗涤去除未结合蛋白后，以低pH缓冲液洗脱目标抗体，经中和、透析及浓缩，最终置换至含防腐剂的PBS缓冲液中。

3.2 浓度测定

免疫球蛋白浓度通过比尔-朗伯定律确定：1 mg/ml纯化IgG在280 nm波长处的吸光度（A280）为1.4。本产品批次实测A280值经计算换算为1 mg/ml浓度，确保批间一致性。

3.3 纯度验证

抗原亲和纯化工艺可去除山羊血清中绝大多数非特异性蛋白，包括白蛋白、转铁蛋白及其他非IgG免疫球蛋白。经SDS-PAGE和考马斯亮蓝染色评估，抗体纯度典型值≥95%。功能性验证通过ELISA和免疫电泳完成，确认仅与兔IgG及轻链反应，不与兔非免疫球蛋白血清成分结合。

四、推荐应用与稀释方案

以下稀释范围为起始推荐值。由于不同实验体系（样本类型、抗原丰度、检测系统灵敏度）存在差异，用户需根据预实验结果进行优化。

应用 | 推荐稀释范围 | 备注

ELISA（检测用二抗） | 1:1,000 – 1:30,000 | 配合HRP/AP标记的链霉亲和素或直接使用酶标二抗

ELISA（包被用捕获抗体） | 1:100 – 1:500 | 用于包被ELISA板以捕获兔IgG标准品或样本

免疫印迹（WB） | 1:1,000 – 1:30,000 | 建议使用5%脱脂奶粉或BSA封闭及稀释

免疫组织化学（IHC） | 1:200 – 1:2,000 | 适用于福尔马林固定、石蜡包埋或冰冻切片

疫细胞化学（ICC） | 1:200 – 1:2,000 | 适用于细胞爬片或培养细胞

注意：本公司实验室尚未对所有列出应用进行逐一验证。上述稀释范围基于文献及客户反馈整理，用户需自行优化。

五、交叉反应信息与使用注意事项

5.1 预期反应性

强反应：兔IgG（重链和轻链）、兔IgA、兔IgM（通过轻链识别）

可能交叉反应：与其他物种（如小鼠、大鼠、人、山羊等）的IgG可能存在不同程度的交叉反应，原因在于免疫球蛋白轻链（尤其是κ链）的保守性。

无非特异性反应：未检测到针对兔白蛋白、转铁蛋白等其他血清蛋白的抗体。

5.2 应用指导

作为二抗使用：

本抗体未标记任何酶或荧光基团，需配合标记的链霉亲和素或使用标记的山羊抗鸡/抗驴等三抗进行信号放大。更常见的做法是直接购买本抗体的HRP、AP、生物素或荧光标记版本（可向供应商咨询定制）。

若需用于常规WB检测，建议使用HRP标记的山羊抗兔IgG（H+L） 产品；本未偶联版本更适用于构建自行标记体系或ELISA捕获步骤。

用于ELISA捕获：

将本抗体以1:100–1:500稀释于包被缓冲液（如碳酸盐缓冲液，pH 9.6），4°C过夜包被。洗涤封闭后，加入含兔IgG的标准品或样本，随后用HRP标记的抗兔IgG（不同宿主）或直接使用酶标记的蛋白A/G进行检测。

注意叠氮化钠的影响：

缓冲液含0.09%叠氮化钠，该浓度可有效抑制微生物污染。但叠氮化钠会不可逆抑制辣根过氧化物酶（HRP）活性。若计划将本抗体直接标记HRP，需在标记前通过透析或凝胶过滤去除叠氮化钠。若将本抗体用于HRP标记二抗的检测体系（例如作为未标记的捕获抗体），叠氮化钠在洗涤步骤中被移除，无影响。

六、储存与稳定性

储存条件：2–8°C，严禁冷冻。反复冻融会导致抗体聚集及活性下降。

有效期：自收货之日起2年。在有效期内，抗体活性保持稳定。建议分装保存以避免反复开启污染。

运输条件：湿冰运输（2–8°C）。收到后请立即存放于2–8°C。

总结

本山羊抗兔IgG（H+L）亲和纯化抗体提供1 mg/ml标准浓度，经抗原亲和纯化确保高特异性和低背景。2–8°C储存条件下有效期长达2年，适合实验室常规备存。产品适用于ELISA、ICC、IHC和WB四大应用领域，既可作检测用二抗，亦可作ELISA捕获抗体。由于未偶联标记，用户可根据实验需要自行偶联HRP、生物素、荧光素等，或直接用于非标记检测体系。请注意叠氮化钠对HRP的抑制作用及与其他物种IgG的可能交叉反应，建议在正式实验前进行必要的对照测试。