武汉艾美捷科技有限公司

一、产品概述

本产品由艾美捷Bethyl Laboratories推出，是一款针对人CDK5RAP2蛋白的高亲和力兔多克隆抗体（货号 IHC-00063），经抗原亲和纯化制备。该抗体经验证适用于免疫细胞化学/免疫荧光（ICC-IF）检测，仅供研究使用。

CDK5RAP2（CDK5 regulatory subunit-associated protein 2）又称Cep215或MCPH3，是中心体相关蛋白，在神经干细胞分裂过程中参与微管组织中心定向及有丝分裂纺锤体形成。CDK5RAP2与Cdk5的激活亚基p25NCK5A结合，而Cdk5是哺乳动物大脑发育中至关重要的脑特异性周期蛋白依赖性激酶。该基因突变与小头畸形（MCPH3型）密切相关，使其成为神经发育及细胞周期研究领域的重要靶点。

二、产品规格

参数 详细信息

靶标 CDK5RAP2

反应种属 人

应用 ICC-IF（免疫细胞化学/免疫荧光）

宿主 兔

克隆性 多克隆

形式 完整IgG

免疫原 位于第1843位至C末端之间

同种型 IgG

偶联物 未偶联

纯度 抗原亲和纯化

抗原种属 人

浓度 500 µg/mL

缓冲液 Tris缓冲盐水，含0.1% BSA及0.09%叠氮化钠

储存条件 2–8°C

有效期 自收货之日起1年

三、靶标详细信息

3.1 别名

C48， CDK5 activator-binding protein C48， centrosomal protein 215 kDa， Centrosome-associated protein 215， centrosomin， Cep215， MCPH3。

3.2 功能背景

CDK5RAP2是一个中心体蛋白，在细胞分裂和神经发育中具有关键作用：

中心体功能调控：CDK5RAP2定位于中心体，参与微管成核及有丝分裂纺锤体的正确组装。它与γ-微管蛋白环复合物相互作用，确保神经前体细胞进行正常的分裂。

与Cdk5/p25的相互作用：CDK5RAP2最初作为Cdk5激活亚基p25的结合蛋白被鉴定。Cdk5在神经元迁移、分化及突触可塑性中发挥重要作用。

小头畸形相关性：CDK5RAP2基因突变是常染色体隐性原发性小头畸形（MCPH3型）的常见原因。患者表现为头围显著减小，但大脑皮层结构基本保留，提示该基因在调控神经干细胞增殖中不可或缺。

中心体相关蛋白215：CDK5RAP2也被称为Cep215，是中心体关键组分，与Pericentrin等蛋白共同维持中心体结构和功能。

四、抗体制备与纯化

4.1 免疫原及表位定位

本抗体采用的免疫原对应人CDK5RAP2蛋白序列中第1843位至C末端之间的区域。经精确定位，IHC-00063所识别的表位位于第1843–1893氨基酸区间（参考序列NP_060719.4）。该区域位于C端结构域，远离其他中心体相关蛋白的同源区，具有较高的抗原特异性。

4.2 纯化方法

抗体通过抗原亲和层析纯化。将针对CDK5RAP2 C端表位（第1843–1893位）的特异性多肽固定于固相载体，使抗血清中的特异性IgG结合于该表位，经洗脱获得高纯度抗体。此法确保最终产品中只保留识别目标表位的抗体分子，显著降低非特异性背景，尤其适合ICC-IF等高分辨率成像应用。

4.3 浓度测定

免疫球蛋白浓度采用比尔定律测定，以1 mg/mL IgG在280 nm下的吸光度（A280）为1.4作为标准。实测浓度为500 µg/mL。

4.4 缓冲液与防腐剂

抗体储存于Tris缓冲盐水（TBS），含0.1%牛血清白蛋白（BSA）作为稳定剂，及0.09%叠氮化钠作为防腐剂。BSA可防止抗体在稀释及储存过程中吸附于管壁，保持其稳定性。注意：叠氮化钠有毒，操作时请佩戴防护手套。若用于活细胞染色或动物实验，使用前应通过透析或超滤去除叠氮化钠。

五、储存与稳定性

收到产品后，请将抗体置于2–8°C条件下储存。切勿冷冻，反复冻融会导致抗体变性聚集、效价下降。在推荐的储存条件下，自收货之日起1年内可保持稳定。由于本抗体浓度为500 µg/mL，不建议分装冻存（稀释后稳定性下降），应于2–8°C原管保存，每次取用后立即放回。

六、应用指南：免疫细胞化学/免疫荧光（ICC-IF）

本抗体经验证适用于ICC-IF，以下提供针对不同固定方法的优化方案。

6.1 推荐稀释比

甲醛固定细胞：1:100 – 1:500

甲醇固定细胞：1:100 – 1:500

丙酮固定：不推荐

6.2 阳性对照

推荐使用人U2OS骨肉瘤细胞或HeLa细胞。这些细胞系中CDK5RAP2定位于中心体，在间期细胞中呈现为靠近细胞核旁的1-2个点状信号，在有丝分裂期细胞中定位于纺锤体极。使用已知的CDK5RAP2抗体或中心体标记物（如γ-tubulin）进行共定位可作为阳性对照。

6.3 信号特征与解读

间期细胞：CDK5RAP2应呈现为1–2个明亮的点状信号，位于中心体（通常紧邻细胞核）。

有丝分裂细胞：信号位于纺锤体两极。

阴性对照：使用免疫前兔血清或仅二抗孵育应无特异性点状信号。

6.4 注意事项

1. 透化条件优化：过度透化可能破坏中心体结构，导致信号弥散。若Triton X-100浓度过高或孵育时间过长，可降至0.1–0.2%，室温5–10分钟。

2. 封闭液选择：含BSA或正常血清均可。若背景高，可延长封闭时间至1小时或使用商业封闭液。

3. 抗体稀释液：建议使用含1% BSA和0.1% Triton X-100的PBS，以降低非特异性吸附。

4. 二抗交叉吸附：确保二抗经过预吸附处理，以减少与固定细胞中内源IgG的交叉反应。

5. 成像条件：CDK5RAP2信号相对较弱，建议使用共聚焦显微镜或高灵敏度宽场显微镜，适当延长曝光时间。

七、参考文献（部分）：

Bond J， et al. (2005) *Nat Genet* 37: 353–355.

Fong KW， et al. (2008) *Mol Biol Cell* 19: 540–551.

Buchman JJ， et al. (2010) *Curr Biol* 20: 1327–1334.

注意：本产品仅限研究使用，不得用于诊断或治疗。用户应自行验证抗体在其特定实验体系中的适用性。以上信息覆盖了IHC-00063抗体的全部规格、应用参数及背景知识，使用者可据此快速建立ICC-IF实验方案，获得清晰可靠的中心体定位结果。