武汉艾美捷科技有限公司

本抗体为艾美捷Bethyl Laboratories推出的兔源多克隆抗体（货号：A300-508A），特异性识别AMPK催化亚基α2的第350–400位氨基酸区域。经抗原亲和纯化，提供完整IgG分子形式，未偶联任何标记物（Unconjugated），浓度为1000 µg/mL（1 mg/mL）。适用于免疫沉淀（IP）和蛋白质印迹（WB），反应种属包括人和小鼠。

产品规格与理化参数

参数项目 详细规格

目标抗原 AMPK alpha 2（AMPK催化亚基α2）

反应种属 小鼠、人

宿主来源 兔

克隆类型 多克隆

抗体形式 完整IgG

免疫原 第350–400位氨基酸之间的区域

亚型 IgG

偶联物 无

纯度 抗原亲和纯化

抗原物种 人

浓度 1000 µg/mL（1 mg/mL）

保存条件 2–8 °C

有效期限 自收货起1年

缓冲体系 Tris-枸橼酸-磷酸盐缓冲液，pH 7–8，含0.09%叠氮化钠

浓度测定依据：采用比尔定律（Beer’s Law），标准为1 mg/mL IgG在280 nm波长处的吸光值（A280）为1.4。

本抗体的靶向优势：识别第350–400位氨基酸区域，可特异性检测α2亚基而不与α1交叉反应（该区域在α1和α2之间差异较大）。适用于区分两种亚基的表达水平及功能研究。

别名：AMPKα2、AMPK2、AMPKa2、PRKAA、ACACA激酶、HMGCR激酶、乙酰辅酶A羧化酶激酶等。

适用范围与推荐使用条件

> 重要说明：本抗体的应用经验集中于免疫沉淀（IP）和Western blot（WB）。使用前建议根据样本类型（细胞裂解液、组织匀浆）和表达丰度进行预实验优化。

应用技术 推荐使用条件 备注

免疫沉淀（IP） 6 µg抗体/毫克裂解液 按总蛋白质量计算抗体用量

蛋白质印迹（WB） 1:500 – 1:5,000 推荐起始稀释度1:1,000

Western blot 详细操作指南

标准WB流程（细胞裂解液）

以下参数已由生产实验室验证并推荐：

样本制备：使用含蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂的裂解缓冲液（如RIPA或NP-40裂解液）提取总蛋白

凝胶选择：SDS-PAGE（推荐8–10%分离胶；AMPKα2分子量约62 kDa）

转膜：PVDF或硝酸纤维素膜，恒流转膜（建议300 mA，90–120分钟）

封闭液：5% 脱脂牛奶-TBST

抗体稀释液：5% 脱脂牛奶-TBST（与封闭液一致）

一抗孵育：过夜（推荐4°C摇床孵育）

一抗稀释度：1:500 – 1:5,000（一般从1:1,000开始测试）

洗涤：TBST洗涤3次，每次10分钟

二抗：山羊抗兔IgG（重链+轻链）HRP偶联抗体，货号 A120-101P（或其他等效产品），按厂商推荐稀释度使用（通常1:5,000–1:20,000）

检测：化学发光法（ECL）显影

免疫沉淀后Western blot的特殊要求

当本抗体用于免疫沉淀实验，随后对免疫沉淀复合物进行Western blot检测时，洗脱产物中包含用于IP的抗体（兔IgG）的重链（约55 kDa）和轻链（约25 kDa）。常规抗兔IgG（H+L）二抗会同时识别它们，可能在目标蛋白（AMPKα2，约62 kDa）附近或轻链/重链位置产生干扰条带（尤其是重链55 kDa非常接近目标62 kDa）。

优化方案（生产实验室推荐）：

1. 二抗选择：使用抗兔IgG轻链HRP偶联抗体（仅识别兔IgG轻链，不识别重链）

2. 封闭缓冲液补充：在封闭液中加入5% 正常猪血清（货号 S100-020），进一步降低非特异性背景

操作步骤：

完成免疫沉淀后，将洗脱的蛋白样本煮沸变性，进行SDS-PAGE（8–10%凝胶）

转膜后，封闭液使用含5%正常猪血清的5%牛奶-TBST（或单独5%正常猪血清-TBST），室温封闭1小时

一抗孵育：仍使用本抗体，稀释度1:1,000（或1:500–1:2,000），用含5%正常猪血清的封闭液稀释，4°C过夜

洗涤：TBST洗涤3次，每次10分钟

二抗孵育：使用抗兔IgG轻链HRP偶联抗体（按照厂商推荐稀释度，通常1:2,000–1:10,000），室温1小时

洗涤：TBST洗涤3–5次

检测：ECL显影

原理：免疫沉淀洗脱物中兔IgG重链（55 kDa）不会被轻链特异性二抗识别，因此膜上不会出现55 kDa的非特异性条带，从而清晰观察62 kDa位置的AMPKα2信号。轻链（25 kDa）信号仍可被检测到但远离目标区域，不影响数据分析。

储存与稳定性

储存条件：

温度：2–8°C（严禁冷冻）

防腐剂：缓冲液含0.09%叠氮化钠，抑制细菌生长

分装建议：如需避免反复取用污染，可无菌分装为单次使用量，仍储存于2–8°C（不推荐-20°C，可能引起蛋白聚集和活性下降）

有效期：自收货之日起12个月。超过有效期后使用，建议重新验证效价（如通过WB检测阳性对照样本）。