武汉艾美捷科技有限公司

本抗体为艾美捷Bethyl Laboratories推出的鸡源多克隆抗体（货号：A190-118A），特异性识别V5标签肽段序列（GKPIPNPLLGLDST）。经抗原亲和纯化，提供完整IgG分子形式，未偶联任何标记物（Unconjugated），浓度为1 mg/mL。适用于Western blot、ELISA、免疫细胞化学和免疫沉淀等常见标签检测场景。

产品规格与理化参数

参数项目 详细规格

目标抗原 V5标签（氨基酸残基95–108）

反应种属 标签通用（重组蛋白/融合蛋白）

宿主来源 鸡

克隆类型 多克隆

抗体形式 完整IgG

亚型 IgG

偶联物 无

纯度 抗原亲和纯化

浓度 1 mg/mL

保存条件 2–8 °C

有效期限 自收货起1年

缓冲体系 含0.09%叠氮化钠的磷酸盐缓冲液（PBS）

浓度测定依据：采用比尔定律（Beer’s Law），标准为1 mg/mL IgG在280 nm波长处的吸光值（A280）为1.4。

抗原信息与标签优势

V5标签序列：  

GKPIPNPLLGLDST（14个氨基酸残基）  

该序列来源于猴病毒5（Simian Virus 5）RNA聚合酶α亚基的第95–108位氨基酸。

V5标签核心特点：

分子量小（约1.5 kDa），对融合蛋白的天然构象、表达、定位及功能干扰极低

广泛应用于Western blot、免疫沉淀、免疫荧光及蛋白纯化

与c-Myc、HA、Flag等常用标签无序列同源性，可进行多重标记检测

免疫原制备：  

将合成的V5标签肽段（GKPIPNPLLGLDST）与匙孔血蓝蛋白（KLH）偶联，免疫鸡只。固相支持物上固定该肽段，通过亲和层析分离特异性抗体。

生产与纯化流程

1. 免疫方案：使用KLH偶联的合成肽段免疫鸡，诱导产生多克隆抗血清  

2. 血清处理：固相吸附处理，去除与载体蛋白或其他非特异性序列的交叉反应  

3. 亲和纯化：将V5标签肽段固定在层析基质上，从抗血清中特异性捕获抗V5抗体  

4. 浓度标定：A280法，1 mg/mL对应吸光值1.4  

5. 质控放行：经Western blot和ELISA双重验证与V5标签阳性蛋白的特异性识别能力

适用范围与推荐稀释/使用比例

重要提示：并非所有列出的应用均已由生产实验室逐一验证。首次使用前建议进行梯度稀释预实验，以确定最佳工作浓度。

应用技术 推荐使用范围 备注

酶联免疫吸附测定（ELISA） 1:1,000 – 1:30,000 包被板适用：1:100 – 1:500

免疫细胞化学（ICC） 1:100 – 1:400 适用于细胞染色

免疫沉淀（IP） 1 – 4 µg抗体/毫克裂解液 按蛋白质量计算抗体用量

蛋白质印迹（WB） 1:1,000 – 1:30,000 详见下方WB操作参数

Western blot 标准操作参数（由生产实验室测试确认）：

封闭液与抗体稀释液：5% 脱脂牛奶-TBST

一抗孵育：过夜（4°C或室温） —— 推荐过夜以增强低丰度标签信号

推荐二抗：驴抗鸡IgG（重链+轻链）抗体，货号 A50-101P（或其他公司等效产品）

应用选择建议：

高丰度融合蛋白WB检测：起始稀释度1:5,000–1:10,000

低丰度或瞬转表达样本WB：1:1,000–1:2,000

ELISA夹心法检测：检测抗体使用1:5,000–1:20,000；包被捕获抗体使用1:100–1:500

ICC细胞染色：1:200起始，根据信号强度和背景调整（范围1:100–1:400）

IP实验：对于1 mg细胞裂解物，推荐2 µg抗体；如目标蛋白表达丰度极低，可增加至4 µg。

操作注意事项与优化建议

通用注意事项

防腐剂影响：缓冲液中含有0.09%叠氮化钠，可能抑制HRP活性。若后续偶联HRP标记二抗进行检测，建议在使用前通过透析或超滤去除叠氮化钠

避免冷冻：本品应始终保存于2–8°C。冷冻会导致抗体蛋白变性、聚集及活性丧失

无菌操作：取用抗体时应使用无菌枪头，避免污染整管

针对不同应用的优化

Western blot：

转印后膜封闭：5%脱脂牛奶-TBST，室温1小时

一抗稀释液同样使用5%牛奶-TBST（与封闭液一致，降低背景）

洗涤：TBST洗涤3次，每次10分钟

二抗选择：推荐鸡特异性二抗（如驴抗鸡IgG-HRP），避免与一抗宿主交叉

免疫沉淀：

裂解液选择：使用非变性裂解液（如RIPA缓冲液或NP-40裂解液）保存蛋白-标签相互作用

抗体固定化：可直接将抗体与Protein A/G琼脂糖珠预孵育，也可采用抗体先与裂解液孵育后再加入磁珠/琼脂糖珠

洗涤严格度：至少洗涤4次，每次用500 µL裂解液，减少非特异性吸附

洗脱：使用2× SDS上样缓冲液煮沸5分钟

免疫细胞化学：

固定：推荐4%多聚甲醛固定15–20分钟（室温）

透化：使用0.1–0.25% Triton X-100处理5–10分钟（针对细胞内抗原）

封闭：5%正常驴血清或3% BSA-PBS，室温30分钟

一抗孵育：4°C过夜或室温2小时

洗涤：PBS洗涤3次，每次5分钟

ELISA：

包被：可直接包被V5标签融合蛋白，或包被捕获抗体进行夹心ELISA

封闭：2% BSA或5%脱脂牛奶-PBS

检测：使用酶标二抗（推荐抗鸡IgG-HRP），TMB显色

储存与稳定性管理

储存条件：

温度：2–8°C （严禁冷冻）

容器：按单次使用量分装可减少反复开管污染风险，但分装后仍需存放于2–8°C（不推荐-20°C）

避光：无需特殊避光，但避免强光直射

稳定性验证：

有效期：自收货之日起12个月

防腐剂：0.09%叠氮化钠抑制细菌生长，防止长期储存中微生物污染

活性监控：若超过有效期使用，建议重新进行效价测定（如ELISA终点稀释）