武汉艾美捷科技有限公司

产品核心规格

由艾美捷Bethyl Laboratories推出的抗KIF4A抗体（货号A301-074A）是一款靶向驱动蛋白家族成员4A（KIF4A）的兔多克隆抗体。该抗体经抗原亲和纯化，以Whole IgG形式提供，未偶联标记，适用于免疫沉淀（IP）和免疫印迹（WB）检测人源样本。关键参数汇总如下：

参数 详细信息

靶点 KIF4A（驱动蛋白家族成员4A）

反应性 人

应用 IP、WB

宿主 兔

克隆性 多克隆

格式 Whole IgG

浓度 200 µg/ml

纯化方式 抗原亲和纯化

同种型 IgG

偶联物 未偶联

免疫原与表位特异性

该抗体通过针对人KIF4A蛋白C末端区域的特异性表位进行亲和纯化获得。具体而言，识别表位位于第1182位残基与C末端（第1232位残基）之间，参考序列编号基于NP_036442.3（GeneID 24137）。免疫原为人KIF4A蛋白的该区域。

技术要点：KIF4A的C末端区域（1182-1232位）包含参与货物结合、蛋白相互作用及亚细胞定位的关键序列。该区域在驱动蛋白超家族中相对特异，靶向此区域的抗体可减少与其他KIF家族成员（如KIF4B、KIF14等）的交叉反应。生产中采用固相固定化表位亲和纯化，确保高特异性和低背景。抗体浓度通过比尔定律测定，以1 mg/ml IgG在A280吸光度1.4为标准。

储存与稳定性

储存条件：2 8°C

有效期：自收货之日起1年

缓冲液组成：Tris缓冲盐水，含0.1% BSA及0.09%叠氮化钠（防腐剂）

应用与实验方案

通用方法

所有免疫印迹实验均使用5% Milk-TBST作为封闭液和抗体稀释液。一抗孵育条件为过夜（推荐4°C摇动孵育）。

检测体系

实验类型 推荐检测抗体

细胞裂解液Western Blot 羊抗兔IgG重链和轻链抗体（A120-101P）

免疫沉淀物Western Blot 抗兔IgG轻链HRP偶联抗体，封闭缓冲液中添加5%正常猪血清（货号S100-020）

推荐工作浓度

应用 推荐稀释度/用量

免疫沉淀（IP） 6 µg/mg裂解物

免疫印迹（WB） 1:2000 1:10000

详细实验提示：

免疫印迹（WB）：推荐起始稀释比为1:2000。KIF4A分子量约为140 kDa，在多数人细胞系（如HeLa、HEK293T）中表达水平中等。若信号过强可提高至1:5000-1:10000；若信号弱可降至1:1000。建议使用HeLa细胞全裂解液作为阳性对照。转膜后使用5% Milk-TBST室温封闭1小时，一抗4°C孵育过夜，二抗室温孵育1小时，ECL化学发光检测。注意KIF4A可能存在磷酸化修饰导致迁移率改变，预期条带位置可能在130-150 kDa范围。

免疫沉淀（IP）：按照6 µg抗体/mg总蛋白裂解物的比例加入抗体。推荐使用非变性裂解液（如含50 mM Tris-HCl pH 7.4、150 mM NaCl、1% NP-40、0.5%脱氧胆酸钠及蛋白酶抑制剂）制备裂解物。抗体与裂解物在4°C旋转孵育2-4小时或过夜，然后加入Protein A/G磁珠，继续孵育1-2小时。用裂解缓冲液洗涤3-5次后，用1× SDS上样缓冲液95°C加热5分钟洗脱免疫复合物，用于后续WB分析。

IP后WB检测：推荐使用抗兔IgG轻链HRP偶联抗体（配合5%正常猪血清封闭）进行检测，以避免兔IgG重链信号（约55 kDa）的干扰。尽管KIF4A分子量（~140 kDa）与重链距离较远，但使用轻链特异性二抗可进一步降低背景，尤其当分析IP洗脱液中可能存在的非特异性沉淀时。注意：若使用常规抗兔HRP二抗（识别重链和轻链），则在目标条带附近不会有重链干扰，但可能出现轻链（~25 kDa）的非特异信号，通常不影响140 kDa检测。

别名

Chromokinesin-A、chromosome-associated kinesin KIF4A、KIF4、KIF4G1、MRX100

使用注意事项

1. 防腐剂安全：缓冲液含0.09%叠氮化钠，有毒，操作时需佩戴手套和护目镜。叠氮化钠会抑制HRP活性，若使用HRP偶联二抗，应在封闭和洗涤步骤中确保充分去除残留（可通过增加洗涤次数或使用不含叠氮化钠的缓冲液稀释抗体）。

2. 稀释优化：不同细胞系中KIF4A表达水平差异显著。有丝分裂同步化细胞中KIF4A高表达，而静止期细胞中极低。推荐使用同步化细胞（如双胸腺嘧啶阻断或诺考达唑处理释放后的有丝分裂细胞）作为阳性对照。正式实验前进行梯度稀释（WB：1:1000、1:2000、1:5000、1:10000）以确定最佳信噪比。

3. 分子量确认：KIF4A预测分子量约140 kDa，但实际迁移可能受磷酸化、泛素化等修饰影响。在SDS-PAGE中可能出现130-150 kDa范围内的多个条带，尤其在有丝分裂细胞中磷酸化异构体可能产生迁移滞后。建议使用磷酸酶处理裂解物辅助条带鉴定。

4. IP条件优化：由于KIF4A参与多种蛋白复合物，建议使用温和裂解缓冲液（如含0.5-1% NP-40，不含SDS）以保持相互作用。同时设置兔IgG同型对照作为阴性对照。洗涤步骤需充分，以减少非特异性结合。

5. 交叉反应性：已验证人反应性。经序列比对，小鼠Kif4a（NP_032476.2）C末端区域（1182-1232）与人KIF4A的同源性约为65%，该抗体对小鼠样本的交叉反应性未经验证。如需检测小鼠样本，建议预先通过WB验证。此外，KIF4B是KIF4A的旁系同源物，C末端差异较大，交叉反应可能性低。

6. 胞质分裂实验中的注意事项：研究胞质分裂时，建议使用免疫荧光结合本抗体进行定位分析（虽然应用列表中未标注IHC/IF，但可自行尝试，需优化条件）。同步化后释放不同时间点取样，观察KIF4A在中体的聚集。