武汉艾美捷科技有限公司

产品核心规格

由艾美捷Bethyl Laboratories抗JMJD2A抗体（货号A300-861A）是一款靶向Jumonji结构域组蛋白去甲基化酶JMJD2A（又称KDM4A）的兔多克隆抗体。该抗体经抗原亲和纯化，以Whole IgG形式提供，未偶联标记，适用于免疫沉淀（IP）和免疫印迹（WB）检测人源及小鼠来源样本。关键参数汇总如下：

参数 详细信息

靶点 JMJD2A / KDM4A（赖氨酸特异性去甲基化酶4A）

反应性 人、小鼠

应用 IP、WB

宿主 兔

克隆性 多克隆

格式 Whole IgG

浓度 200 µg/ml

纯化方式 抗原亲和纯化

同种型 IgG

偶联物 未偶联

免疫原与表位特异性

该抗体通过针对人JMJD2A蛋白C末端区域的特异性表位进行亲和纯化获得。具体而言，识别表位位于第1010位残基与C末端（第1064位残基）之间，参考序列编号基于NP_055478.1（GeneID 9682）。免疫原为人JMJD2A蛋白的该区域。

技术要点：C末端区域包含JMJD2A特有的Tudor结构域（位于第9121040位附近），该结构域参与识别组蛋白修饰（如H3K4me3和H4K20me3）并调控去甲基化酶活性。靶向此区域的抗体可特异性检测全长JMJD2A，且与其他Jumonji家族成员（如JMJD2C、JMJD2D）的交叉反应风险较低。生产中采用固相固定化表位亲和纯化，确保高特异性和低背景。

储存与稳定性

储存条件：2-8°C

有效期：自收货之日起1年

缓冲液组成：Tris缓冲盐水，含0.1% BSA及0.09%叠氮化钠（防腐剂）

浓度测定：采用比尔定律，以1 mg/ml IgG在A280吸光度1.4为标准

应用与实验方案

通用方法

所有免疫印迹实验均使用5% MilkTBST作为封闭液和抗体稀释液。一抗孵育条件为过夜（推荐4°C摇动孵育）。

检测体系

实验类型 推荐检测抗体

细胞裂解液Western Blot 羊抗兔IgG重链和轻链抗体（A120101P）

免疫沉淀物Western Blot 抗兔IgG轻链HRP偶联抗体，封闭缓冲液中添加5%正常猪血清（货号S100020）

推荐工作浓度

应用 推荐稀释度/用量

免疫沉淀（IP） 6 µg/mg裂解物

免疫印迹（WB） 1:1000  1:5000

实验提示：

WB起始稀释：建议从1:1000开始，根据信号强度调整至1:20001:5000。JMJD2A在多数细胞系中表达水平中等，若使用高灵敏度化学发光底物可适当提高稀释比。

IP用量计算：按照6 µg抗体/mg总蛋白裂解物的比例加入抗体。推荐裂解液使用RIPA缓冲液（含蛋白酶抑制剂），4°C孵育24小时或过夜后，用Protein A/G磁珠捕获。

IP后WB检测：必须使用抗兔IgG轻链HRP抗体（而非抗重轻链抗体），以避免IgG重链信号（约55 kDa）干扰JMJD2A目标条带的检测。JMJD2A分子量约为120130 kDa，重链信号位于5055 kDa区域，通常不直接重叠，但轻链特异性检测可进一步降低背景。

别名

JHDM3A、jmjC domaincontaining histone demethylation protein 3A、JMJD2、JMJD2A、jumonji C domaincontaining histone demethylase 3A、jumonji domain containing 2、jumonji domain containing 2A、jumonji domaincontaining protein 2A、lysine (K)specific demethylase 4A、lysinespecific demethylase 4A、TDRD14A、tudor domain containing 14A

使用注意事项

1.防腐剂安全：缓冲液含0.09%叠氮化钠，有毒，操作时需佩戴手套和护目镜，避免皮肤接触。叠氮化钠可能抑制HRP活性，若计划进行HRP偶联二抗检测，需确保在二抗稀释及洗涤步骤中充分去除残留。

2.稀释优化：不同细胞系或组织中JMJD2A表达水平差异较大。例如，HeLa、HEK293T等细胞中表达较高，而部分正常组织表达较低。建议进行预实验梯度稀释（1:500、1:1000、1:2000、1:5000）确定最佳信噪比。

3.分子量确认：JMJD2A的预测分子量约为120 kDa，但由于翻译后修饰（磷酸化、泛素化等），实际迁移位置可能在110140 kDa之间。建议同时使用阳性对照裂解物（如HeLa全细胞裂解物）验证条带位置。

4.IP后WB检测：虽然JMJD2A分子量（~120 kDa）与兔IgG重链（~55 kDa）无重叠，但轻链特异性HRP抗体可消除由重链引起的非特异背景，尤其在分析IP洗脱液中可能共沉淀的轻链降解片段时更为必要。推荐添加5%正常猪血清以封闭非特异性结合。

5.交叉反应性：已验证人、小鼠反应性。经序列比对，该C末端表位区域在小鼠JMJD2A（NP_001276468.1）中具有高度同源性。对其他Jumonji家族成员的潜在交叉反应未经验证，建议通过敲低/敲除样本进行特异性确认。

产品优势总结

高特异性表位：靶向C末端Tudor结构域附近区域（10101064位），区别于靶向催化域的抗体，适用于区分JMJD2A与其它KDM4亚家族成员。

双种属验证：同时识别人类和小鼠JMJD2A，便于跨物种实验比较。

宽工作范围：WB稀释比1:10001:5000，兼容不同表达丰度样本的检测。

亲和纯化IgG：200 µg/ml高浓度，经抗原亲和纯化去除血清蛋白和非特异性抗体，确保低背景。

长期稳定：28°C储存，1年有效期，无需分装冷冻，避免反复冻融带来的效价损失。

研究应用方向

该抗体适用于以下研究领域：

组蛋白去甲基化酶在表观遗传调控中的功能研究

JMJD2A与pRb/HDAC复合物在细胞周期及肿瘤发生中的作用

E2F调控启动子的转录抑制机制

DNA损伤修复、细胞分化及干细胞干性维持

小分子抑制剂（如JMJD2A抑制剂）的效果评价

该抗体为解析JMJD2A在染色质重塑、转录调控及肿瘤表观遗传学中的功能提供了稳定、特异性的工具。