武汉艾美捷科技有限公司

产品核心规格

由艾美捷Bethyl Laboratories推出的抗PPP4C抗体（货号A300-835A）是一款靶向蛋白磷酸酶4催化亚基（PPP4C）的兔多克隆抗体，经抗原亲和纯化，以Whole IgG形式提供。该抗体适用于人源及小鼠来源样本的免疫组化（IHC）、免疫沉淀（IP）和免疫印迹（WB）检测。关键参数汇总如下：

参数信息

参数 详细信息

靶点 PPP4C（蛋白磷酸酶4催化亚基）

反应性 人、小鼠

应用 IHC、IP、WB

宿主 兔

克隆性 多克隆

格式 Whole IgG

浓度 200 µg/ml

纯化方式 抗原亲和纯化

同种型 IgG

偶联物 未偶联

免疫原与表位特异性

该抗体的免疫原为人PPP4C蛋白第1至50位氨基酸之间的区域（参考序列NP_002711.1，GeneID 5531）。生产中采用固相固定化表位亲和纯化技术，使用针对PPP4C的特异性表位进行纯化，确保抗体仅识别目标区域，降低与非相关蛋白的交叉反应。

表位定位：第1-50位残基位于PPP4C的N端区域。该区域在不同物种间相对保守，因此抗体具备人鼠交叉反应性。同时，由于远离C端调控结构域，该抗体适用于检测PPP4C的全长形式及潜在剪切变异体。

储存与稳定性

储存条件：2-8°C

有效期：自收货之日起1年

缓冲液组成：Tris缓冲盐水，含0.1% BSA及0.09%叠氮化钠（防腐剂）

浓度测定：采用比尔定律，以1 mg/ml IgG在A280吸光度1.4为标准

应用与实验方案

通用方法

所有免疫印迹实验均使用5% Milk-TBST作为封闭液和抗体稀释液，一抗孵育条件为过夜（建议4°C摇动孵育）。

不同应用的检测体系

实验类型 推荐检测抗体

细胞裂解液Western Blot 羊抗兔IgG重链和轻链抗体（A120-101P）

免疫沉淀物Western Blot 抗兔IgG轻链HRP偶联抗体，封闭缓冲液中添加5%正常猪血清（货号S100-020）

免疫组化（IHC） 推荐使用枸橼酸盐缓冲液（pH 6.0）进行抗原修复（针对FFPE组织切片）

推荐工作浓度

应用 推荐稀释度/用量

免疫组化（IHC） 1:200 1:1000

免疫沉淀（IP） 6 µg/mg裂解物

免疫印迹（WB） 1:2000 1:10000

实验提示：

IP实验中，按照6 µg抗体/mg总蛋白裂解物的比例加入抗体，4°C孵育2-4小时或过夜后，使用Protein A/G磁珠或琼脂糖珠捕获免疫复合物。

WB实验中，推荐起始稀释比为1:2000，若信号过强可提高至1:5000-1:10000；若信号弱可适当降低稀释比。

IHC实验中，建议对石蜡包埋切片进行脱蜡、水化后，使用枸橼酸盐缓冲液（pH 6.0）高压或微波热修复，然后进行封闭和一抗孵育（4°C过夜）。

靶点背景：PPP4C / 蛋白磷酸酶4催化亚基

PPP4C（亦称PPX或PP4C）是丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶PP4全酶的催化亚基。PP4全酶由催化亚基PPP4C与调节亚基（PP4-R1或PP4-R2）结合形成。该磷酸酶在多个关键细胞通路中发挥调控作用：

功能领域 具体作用

NF-κB信号通路 PP4直接与NF-κB相互作用并激活该转录因子，参与免疫及炎症反应调控

转录调控 PP4与组蛋白去乙酰化酶HDAC3相互作用，影响染色质状态和基因表达

细胞分裂 PP4在有丝分裂过程中参与微管组织，确保染色体正确分离

MAPK/JNK通路 PP4参与MAPK和JNK-1信号通路的调控，影响细胞应激、增殖和凋亡

别名：epididymis secretory sperm binding protein、PP4、PP4C、PPH3、PPP4、PPX、PP-X、protein phosphatase 4 catalytic subunit、protein phosphatase X catalytic subunit

使用注意事项

1. 防腐剂风险：缓冲液含0.09%叠氮化钠，具毒性，操作时需佩戴手套和护目镜，避免皮肤接触。

2. 稀释优化：不同批次细胞或组织样本中PPP4C表达水平可能存在差异，建议对WB和IHC稀释度进行预实验梯度优化。

3. IP后WB检测：免疫沉淀样本的Western Blot检测必须使用抗兔IgG轻链HRP抗体（而非常规抗重轻链抗体），以免IgG重链信号（约55 kDa）干扰目标蛋白（PPP4C分子量约35 kDa）的检测。

4. IHC抗原修复：福尔马林固定石蜡包埋切片必须进行热介导的抗原修复（枸橼酸盐缓冲液pH 6.0），否则信号可能显著减弱或消失。

5. 交叉反应性：已验证人、小鼠反应性，不保证其他物种。若需检测大鼠或其他物种样本，建议预先通过WB验证。

产品优势总结

多功能性：IHC、IP、WB三种应用验证，覆盖蛋白表达定位、相互作用及定量分析需求

宽工作范围：WB稀释比1:2000-1:10000，适应不同丰度样本的检测

高特异性：N端50个氨基酸区域表位亲和纯化，减少与其他磷酸酶家族成员的交叉反应

长期稳定性：2-8°C储存，1年有效期，便于实验室日常管理

该抗体为研究PP4全酶在NF-κB活化、HDAC3介导的转录调控、有丝分裂进程以及糖尿病、炎症、肿瘤等相关疾病中的功能提供了可靠的工具。