武汉艾美捷科技有限公司

产品概述

由艾美捷Bethyl Laboratories推出的eIF3B/EIF3S9抗体（货号A301-761A）是一种兔源多克隆抗体，特异性靶向人源真核翻译起始因子3亚基B（eukaryotic translation initiation factor 3 subunit B，亦称eIF3S9或eIF3 p110）。该抗体以全IgG形式提供，浓度为200 µg/ml，经抗原亲和纯化，未偶联标记物，适用于免疫组化（IHC）、免疫沉淀（IP）和Western Blot（WB）检测。

免疫原与特异性

本抗体的免疫原对应人源eIF3B蛋白第100至150位氨基酸残基之间的区域，参考序列号为NP_003742.2（GeneID 8662）。通过表位特异性亲和纯化工艺，将针对eIF3B固定化表位的抗体从抗血清中分离纯化，确保高特异性识别目标抗原。该表位位于eIF3B蛋白的N端附近，该区域包含一个非经典的RNA识别基序（RRM），与eIF3复合物的组装和RNA结合功能密切相关。

技术参数

参数 | 详细信息

靶标 | eIF3B / EIF3S9 (Eukaryotic translation initiation factor 3 subunit B)

反应性 | 人

应用 | 免疫组化（IHC）、免疫沉淀（IP）、Western Blot（WB）

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

形式 | 全IgG

免疫原 | 第100–150位氨基酸区间

同型 | IgG

偶联物 | 未偶联

纯度 | 抗原亲和纯化

抗原种属 | 人

浓度 | 200 µg/ml

储存条件 | 2–8 °C

保质期 | 收货后1年

缓冲液 | Tris缓冲盐水，含0.1% BSA及0.09%叠氮化钠

浓度测定方法

免疫球蛋白浓度采用比尔定律测定，其中1 mg/ml IgG在280 nm波长下的吸光度（A280）为1.4。

Western Blot实验方案

推荐稀释度

1:2,000 – 1:10,000

实验条件

封闭及稀释液：5%脱脂牛奶-TBST

一抗孵育：过夜孵育（4°C）

二抗（细胞裂解液WB）：山羊抗兔IgG重链和轻链抗体（货号A120-101P）

二抗（免疫沉淀物WB）：使用抗兔IgG轻链HRP偶联抗体，并在封闭缓冲液中加入5%正常猪血清（货号S100-020），以避免免疫沉淀洗脱物中IgG重链（约55 kDa）对目标信号产生干扰。

样品制备与凝胶选择

eIF3B分子量约为110–116 kDa。推荐使用8-10% SDS-PAGE凝胶进行分离。转印可采用湿转（100V，1.5小时）或半干转。使用PVDF或硝酸纤维素膜均可。

免疫沉淀实验方案

推荐用量：6 µg抗体/mg细胞裂解物

裂解液建议：推荐使用含蛋白酶抑制剂的温和裂解缓冲液（如50 mM Tris-HCl pH 7.5，150 mM NaCl，1% NP-40，0.5%脱氧胆酸钠），以维持eIF3全复合物的完整性。

捕获基质：Protein A琼脂糖或磁珠。

免疫组化实验方案

推荐稀释度：1:100 – 1:500

抗原修复：对于福尔马林固定、石蜡包埋（FFPE）组织切片，推荐使用柠檬酸缓冲液（pH 6.0）进行热诱导抗原修复（微波或高压修复）。

封闭与检测：建议使用5%正常血清（与二抗同源）封闭非特异性结合位点。可采用生物素化二抗配合DAB显色，或荧光标记二抗进行免疫荧光检测。

靶点背景信息

蛋白功能

真核起始因子3亚基B（eIF3B）是真核起始因子3（eIF3）至少13个非相同蛋白亚基之一。eIF3是最大的真核起始因子（约650 kDa），其核心功能是促进40S核糖体亚基结合至细胞mRNA 5’端帽子结构（m7GpppN）附近，从而启动翻译。

eIF3B是一个保守的亚基，属于eIF3的功能核心组分。它具有一个非经典的RNA识别基序（RRM），并能直接与eIF3S1亚基相互作用。eIF3B在eIF3复合物组装、mRNA识别以及43S前起始复合物形成中发挥关键作用。

结构与相互作用

分子量：约110–116 kDa（氨基酸序列计算值约105 kDa，SDS-PAGE表观分子量约110–116 kDa）。

亚基定位：eIF3B位于eIF3复合物的核心区域，与eIF3A、eIF3C、eIF3G等亚基共同构成复合物骨架。

相互作用伙伴：除eIF3S1外，eIF3B还与其他eIF3亚基、40S核糖体蛋白及mRNA结合蛋白相互作用。

产品优势与功能特点

1. 三平台通用验证（IHC/IP/WB）：本抗体在免疫组化、免疫沉淀和Western Blot中均提供推荐工作条件，覆盖了组织定位、蛋白复合物捕获和表达定量的一体化研究需求。IHC起始稀释度1:100–1:500，并明确提供柠檬酸缓冲液pH 6.0修复方案；WB稀释范围1:2,000–1:10,000，灵敏度高，适合内源性eIF3B检测。

2. 抗原亲和纯化：采用针对eIF3B第100–150位表位的固相亲和纯化，有效去除与其它eIF3亚基或非特异性蛋白交叉反应的抗体，显著降低IHC和WB中的背景信号，提高IP产物的纯度。

3. BSA稳定化TBS配方：缓冲液含0.1% BSA作为载体蛋白，防止抗体在低浓度下吸附损失；0.09%叠氮化钠作为防腐剂。2–8°C下可稳定保存1年，无需冷冻，避免反复冻融导致的活性下降。

4. IP-WB联用优化设计：配套提供抗兔IgG轻链HRP二抗及5%正常猪血清封闭方案，有效消除免疫沉淀洗脱物中55 kDa重链的干扰信号，确保在eIF3B分子量（110 kDa）附近获得清晰的目标条带。

5. 精准定量：基于比尔定律（A280=1.4对应1 mg/ml IgG）进行浓度测定，确保批次间一致性，提升实验可重复性。

6. 明确的表位区域：免疫原映射至100-150位氨基酸，该区域包含eIF3B的非经典RRM基序。使用本抗体进行IP或WB时，可检测全长蛋白，且识别位点不依赖于磷酸化或翻译后修饰状态。

使用注意事项

本产品仅限研究用途，不可用于临床诊断。

缓冲液中含有叠氮化钠，操作时请佩戴手套和护目镜，避免接触皮肤或粘膜。废弃物请按照当地规定处理。

收货后请立即储存于2–8°C，切勿冷冻。缓冲液中已含0.1% BSA作为稳定剂，但仍不建议冷冻，以免抗体聚集。如需长期保存，可分装后存放于2–8°C，避免反复开启。

IP实验中，6 µg/mg裂解物为起始推荐量。eIF3B在常见细胞系（如HeLa、HEK293、U2OS）中表达丰度较高，可根据实际信号强度下调至4 µg/mg。若用于组织裂解物，可能需要增加用量。

WB实验中，eIF3B表观分子量约110-116 kDa，建议使用8%或10% SDS-PAGE凝胶。转印推荐使用PVDF膜，湿转100V 1.5小时通常足够。

IHC实验中，石蜡切片需充分脱蜡和水化。热诱导抗原修复后，应让切片自然冷却至室温（约20-30分钟），以利抗原表位正确复性。建议设置阳性对照（如已知eIF3B高表达的组织，如肝脏或肿瘤组织）。