武汉艾美捷科技有限公司

一、产品概述

由艾美捷代理Bethyl Laboratories推出的本产品为兔源抗人/小鼠PBEF（pre-B-cell colony enhancing factor 1，又称NAMPT或Visfatin）蛋白特异性多克隆抗体（货号：A300-372A）。PBEF是一种多功能蛋白，既可作为细胞因子（visfatin）分泌于细胞外，调节胰岛素信号和血糖代谢，又作为胞内酶——烟酰胺磷酸核糖转移酶（NAMPT），催化NAD⁺生物合成的限速步骤。PBEF在脂肪组织高度表达，其水平与肥胖、2型糖尿病正相关，同时也参与B细胞分化、炎症应答及细胞存活等过程。本抗体经抗原亲和纯化，识别PBEF蛋白第400–450位氨基酸区域，适用于免疫组化（IHC）、免疫沉淀（IP）及免疫印迹（WB）等多种应用，是代谢、炎症及肿瘤研究领域的重要工具。

二、详细规格

参数 | 规格

靶标 | PBEF（NAMPT/Visfatin）

反应种属 | 小鼠、人

应用 | IHC, IP, WB

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

形式 | 全IgG

免疫原 | 人PBEF蛋白第400–450位氨基酸之间的区域（Swiss-Prot P43490）

抗体类型 | IgG

偶联物 | 未偶联

纯度 | 抗原亲和纯化

抗原种属 | 人

浓度 | 1000 µg/ml（1 mg/ml）

储存温度 | 2 - 8 °C

有效期 | 自收货之日起1年

缓冲液 | Tris-柠檬酸-磷酸缓冲液，pH 7–8，含0.09% 叠氮钠

三、产品制备与质量控制

本抗体采用固相载体固定的PBEF特异性表位进行亲和纯化。免疫原对应人PBEF（GeneID 10135，Swiss-Prot P43490）第400至450位氨基酸区域，该序列在人和小鼠之间高度保守。抗体经抗原亲和层析后，免疫球蛋白浓度通过比尔定律测定（1 mg/ml IgG在280 nm处吸光度为1.4）。

每批次质控标准：

Western blot：在人HEK293、HeLa或小鼠3T3-L1脂肪细胞裂解液中检测到约55–60 kDa的特异性条带（PBEF分子量约55 kDa）；使用重组PBEF蛋白作为阳性对照。

免疫沉淀：6 µg/mg裂解物可从细胞裂解液中有效富集内源性PBEF，洗脱产物经WB检测信号明确。

免疫组化：对小鼠脂肪组织或人胎盘FFPE切片进行染色，应呈现胞浆及核周阳性信号。

四、推荐应用与实验条件

所有Western blot实验建议使用5%脱脂牛奶-TBST作为封闭液和抗体稀释液，一抗孵育条件为4°C过夜。以下为各应用的推荐起始条件：

应用 | 推荐稀释度/用量 | 备注

Western Blot (WB) | 1:10,000 – 1:25,000 | 检测细胞裂解液时，二抗推荐山羊抗兔IgG（H+L）（货号A120-101P）；检测免疫沉淀物时，二抗建议使用抗兔IgG轻链HRP偶联抗体，并在封闭液中加入5%正常猪血清（货号S100-020）以消除重链干扰。

Immunoprecipitation (IP) | 6 µg/mg 裂解物 | 每毫克总蛋白使用6 µl抗体（1 mg/ml浓度对应6 µg）。推荐与Protein A/G磁珠或琼脂糖珠孵育2–4小时或过夜。

Immunohistochemistry (IHC) | 1:2,000 – 1:10,000 | 对福尔马林固定石蜡包埋（FFPE）组织切片，推荐使用pH 6.0枸橼酸盐缓冲液进行热诱导抗原修复（高压或微波）。建议进行梯度滴定以确定最佳稀释度。

五、储存与稳定性

储存条件：2 - 8°C，严禁冷冻。冷冻会导致抗体聚集及活性丧失。

有效期：自收货之日起1年，在2-8°C未稀释、避光保存。

运输条件：冰袋冷藏运输，收货后请立即存放于2-8°C。

防腐剂：缓冲液含0.09%叠氮钠，可抑制微生物生长。注意：叠氮钠会抑制HRP活性，若用于非HRP检测系统（如荧光）则无影响；若需去除，可通过透析或脱盐柱处理。

六、注意事项

1. 仅限科研使用：不得用于临床诊断或治疗。

2. 特异性验证：PBEF存在多种翻译后修饰及剪切异构体，建议在实验中使用已知阳性对照（如3T3-L1脂肪细胞裂解液或重组PBEF蛋白）验证抗体识别条带的正确分子量（~55 kDa）。

3. 样品制备：检测分泌型PBEF时，需收集细胞培养上清并浓缩；检测胞内PBEF时，推荐使用RIPA裂解液（含蛋白酶抑制剂）。

4. IHC抗原修复：对FFPE切片，必须进行热诱导抗原修复（枸橼酸盐pH 6.0），否则信号减弱。建议同时进行不含一抗的阴性对照。

5. 安全操作：叠氮钠有毒，操作时请佩戴手套。废液按有害物处理。

6. 应用范围：本抗体未经验证用于ELISA或流式细胞术，若需使用请自行优化。

七、相关产品推荐

产品类型 | 货号（示例） | 描述

二抗（WB） | A120-101P | 山羊抗兔IgG（H+L）HRP偶联物

二抗（IP-WB） | 轻链特异性 | 抗兔IgG轻链HRP偶联抗体，需配合正常猪血清（S100-020）

阳性对照裂解物 | 可咨询 | 3T3-L1脂肪细胞裂解物或重组PBEF蛋白

阻断肽 | A300-372P | 对应免疫原的竞争肽，用于抗体特异性验证