武汉艾美捷科技有限公司

一、产品概述

由艾美捷代理Bethyl Laboratories推出的本产品为山羊抗小鼠IgG-Fc片段的多克隆抗体（货号：A90-131P），经固相吸附确保类特异性，并通过亲和层析纯化后与辣根过氧化物酶（HRP）共价偶联，酶与抗体的摩尔比为4:1。该抗体特异性识别小鼠IgG分子的Fc区域（重链恒定区），而不与Fab片段或轻链发生交叉反应，同时与IgA、IgM的交叉反应可忽略不计。本品适用于酶联免疫吸附测定（ELISA）、免疫细胞化学（ICC）、免疫组织化学（IHC）及免疫印迹（WB）等多种检测技术，是检测或捕获小鼠来源一抗的理想通用二抗试剂。

二、详细规格

参数 | 规格

靶标 | 小鼠IgG-Fc片段

反应种属 | 小鼠

应用 | ELISA, ICC, IHC, WB

宿主 | 山羊

克隆性 | 多克隆

形式 | 全IgG

抗体类型 | IgG

偶联物 | HRP（辣根过氧化物酶）

纯度 | 抗原亲和纯化

抗原种属 | 小鼠

浓度 | 1 mg/ml

储存温度 | 2 - 8 °C

有效期 | 自收货之日起1年

缓冲液 | 磷酸盐缓冲液（PBS），含0.2% BSA及0.05% Pro-Clean 400

酶/抗体比例：偶联前免疫球蛋白浓度通过比尔定律测定（1 mg/ml IgG在280 nm处吸光度为1.4），最终HRP与IgG摩尔比为4:1，确保高标记效率同时保留抗体结合活性。

三、产品制备与质量控制

本抗体的制备采用多步工艺，确保高特异性与低背景：

1. 免疫与血清采集：使用小鼠IgG-Fc片段作为免疫原免疫山羊，采集抗血清。

2. 固相吸附：抗血清通过固相吸附去除与IgA、IgM及其他血清蛋白交叉反应的组分，确保类特异性。

3. 亲和纯化：将抗原（小鼠IgG-Fc）偶联至琼脂糖凝胶，通过亲和层析分离特异性抗体。

4. HRP偶联：纯化后的抗体与辣根过氧化物酶按优化比例（4:1）共价偶联，经纯化去除游离酶。

5. 质控验证：

免疫电泳：确认抗体仅与小鼠IgG-Fc形成沉淀弧，与IgA、IgM无反应。

ELISA：直接法检测显示对小鼠IgG-Fc的滴度≥1:100,000，对小鼠IgA、IgM的交叉反应<1%。

种属交叉反应测试：可能与其他物种（如大鼠、人）的IgG有轻度交叉，建议在使用前进行预实验验证。

四、推荐应用与实验条件

以下推荐稀释度为起始参考值，不同实验体系（样本类型、一抗浓度、检测灵敏度要求）可能需要进一步优化。

应用 | 推荐稀释度 | 备注

ELISA | 1:10,000 – 1:100,000 | 用于直接或间接ELISA中检测结合的小鼠一抗。建议进行棋盘滴定确定最佳工作浓度。底物推荐TMB或ABTS。

Immunocytochemistry (ICC) | 1:200 – 1:5,000 | 用于细胞爬片或培养细胞的免疫化学染色。固定透化后，孵育小鼠一抗，再以本二抗孵育。DAB或荧光底物均可使用。

Immunohistochemistry (IHC) | 1:200 – 1:5,000 | 适用于福尔马林固定石蜡包埋（FFPE）及冰冻组织切片。需注意内源性过氧化物酶的封闭（如3% H2O2）。

Western Blot (WB) | 1:5,000 – 1:50,000 | 用于检测膜上由小鼠一抗识别的蛋白条带。推荐使用5%脱脂牛奶-TBST封闭及稀释抗体，室温孵育1小时或4°C过夜。ECL化学发光检测。

通用操作步骤：

1. 在完成一抗（小鼠来源）孵育并洗涤后，加入适当稀释的本HRP二抗。

2. 室温孵育30–60分钟。

3. 充分洗涤（WB建议3–5次，每次5分钟；IHC/ICC建议3次，每次5分钟；ELISA建议3–5次，每次3分钟）。

4. 加入相应底物显色或化学发光检测。

五、储存与稳定性

储存条件：2 - 8°C，严禁冷冻。冷冻会导致酶失活及抗体聚集。

有效期：自收货之日起1年，在未稀释、2-8°C避光保存。

运输条件：冰袋冷藏运输，收货后立即存放于2-8°C。

缓冲液成分：含0.2% BSA作为稳定蛋白，0.05% Pro-Clean 400作为防腐剂（替代叠氮钠，因为叠氮钠会抑制HRP活性）。注意：本产品不含叠氮钠，可直接用于HRP检测体系。

避免污染：取用时应使用无菌吸头，避免反复开盖。

六、注意事项

1. 仅限科研使用：不得用于临床诊断或治疗。

2. 内源性过氧化物酶封闭：在进行IHC/ICC或ELISA时，若样本含有内源性过氧化物酶（如血液、组织中的红细胞），需用0.3–3% H₂O₂处理10–20分钟，否则会产生高背景。

3. 种属交叉反应：本抗体可能与其他物种的IgG发生交叉反应（如大鼠、人）。在涉及多种属样本的实验中，建议设置适当的阴性对照或预吸附。

4. 稀释液选择：建议使用含1% BSA或5%脱脂牛奶的PBS/TBST稀释抗体，避免使用叠氮钠作为防腐剂（会抑制HRP）。

5. 工作液稳定性：稀释后的抗体工作液应在当日使用完毕，不建议反复使用或长期保存。

6. 底物选择：HRP的常用底物包括：

ELISA：TMB（450 nm检测）、ABTS（405 nm）、OPD（492 nm）

WB：ECL化学发光底物

IHC/ICC：DAB（棕色沉淀）、AEC（红色沉淀）

7. 对照设置：每次实验应设置仅加二抗（不加一抗）的阴性对照，以评估非特异性结合。