武汉艾美捷科技有限公司

一、产品概述

由艾美捷代理Bethyl Laboratories推出的Bethyl 兔抗HIF1-α抗体，亲和纯化

（货号：A300-286A）为兔源抗人/小鼠HIF-1α（hypoxia-inducible factor 1-alpha）蛋白C端区域（第775–826位氨基酸之间）的特异性多克隆抗体。HIF-1α是细胞应对低氧环境的核心转录因子，与HIF-1β形成异源二聚体，激活数百种靶基因（如VEGF、EPO、GLUT1等）的表达，参与血管生成、代谢重编程、细胞存活及肿瘤进展。常氧条件下HIF-1α被VHL泛素化降解；缺氧时稳定入核，发挥转录活性。本抗体经抗原亲和纯化，适用于免疫细胞化学/免疫荧光（ICC-IF）、免疫组化（IHC）、免疫沉淀（IP）及免疫印迹（WB）等多种应用，是缺氧信号通路研究的关键工具。

二、详细规格

参数 | 规格

靶标 | HIF-1α（缺氧诱导因子1α）

反应种属 | 小鼠、人

应用 | ICC-IF, IHC, IP, WB

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

形式 | 全IgG

免疫原 | 人HIF-1α第776位至C端（第826位）之间的区域（Swiss-Prot Q16665）

抗体类型 | IgG

偶联物 | 未偶联

纯度 | 抗原亲和纯化

抗原种属 | 人

浓度 | 200 ug/ml

储存温度 | 2 - 8 °C

有效期 | 自收货之日起1年

缓冲液 | Tris缓冲盐水，含0.1% BSA及0.09% 叠氮钠

三、产品制备与质量控制

本抗体采用固相载体固定的HIF-1α特异性C端表位进行亲和纯化。免疫原对应人HIF-1α（GeneID 3091，Swiss-Prot Q16665）第775至826位氨基酸区域，该序列在哺乳动物中高度保守，且位于HIF-1α的C端反式激活结构域（C-TAD）内，可有效识别缺氧稳定形式的全长蛋白。抗体经抗原亲和层析后，免疫球蛋白浓度通过比尔定律测定（1 mg/ml IgG在280 nm处吸光度为1.4）。

每批次质控标准：

Western blot：在低氧处理（如1% O2、CoCl2或DFO处理）的人HeLa、HEK293或小鼠NIH/3T3细胞裂解液中，检测到约100–120 kDa的特异性条带（HIF-1α分子量约93 kDa，但由于脯氨酸羟基化及磷酸化修饰，电泳迁移率常显示为100–120 kDa）；常氧对照样品条带极弱或缺失。

免疫沉淀：6 ug/mg裂解物可从缺氧细胞核提取物中有效富集HIF-1α，并检测到与HIF-1β的共沉淀。

IHC/ICC-IF：缺氧处理的细胞或肿瘤组织切片呈现核内或核浆聚集性染色，常氧组织背景极低。

四、推荐应用与实验条件

所有Western blot实验建议使用5%脱脂牛奶-TBST作为封闭液和抗体稀释液，一抗孵育条件为4°C过夜。以下为各应用的推荐起始条件：

应用 | 推荐稀释度/用量 | 备注

Western Blot (WB) | 1:2000 – 1:10000 | 检测细胞裂解液时，二抗推荐山羊抗兔IgG（H+L）（货号A120-101P）；检测免疫沉淀物时，二抗建议使用抗兔IgG轻链HRP偶联抗体，并在封闭液中加入5%正常猪血清（货号S100-020）以消除重链干扰。

Immunoprecipitation (IP) | 6 ug/mg 裂解物 | 每毫克总蛋白使用6 ul抗体（1 mg/ml浓度对应6 ug）。推荐与Protein A/G磁珠或琼脂糖珠孵育2–4小时或过夜。

Immunohistochemistry (IHC) | 1:100 – 1:500 | 对福尔马林固定石蜡包埋（FFPE）组织切片，必须进行热诱导抗原修复：使用枸橼酸盐缓冲液（pH 6.0），高压锅修复20分钟。也可试用Tris-EDTA（pH 9.0），但pH 6.0效果更佳。

Immunocytochemistry/Immunofluorescence (ICC-IF) | 1:100 – 1:500 | 细胞爬片固定后（推荐4%甲醛），建议进行抗原修复：同上用枸橼酸盐缓冲液（pH 6.0）高压修复20分钟，可显著增强核信号。若不做修复，仅对低氧处理细胞也可能获得信号，但修复可提高一致性。

五、储存与稳定性

储存条件：2 - 8°C，严禁冷冻。冷冻会导致抗体聚集和背景升高。

有效期：自收货之日起1年，在2-8°C未稀释、避光保存。

运输条件：冰袋冷藏运输，收货后请立即存放于2-8°C。

防腐剂：缓冲液含0.09%叠氮钠，可抑制细菌生长。注意：叠氮钠会抑制HRP活性，若用于荧光检测则无影响；如需去除，请使用脱盐柱。

六、注意事项

1. 仅限科研使用：不得用于临床诊断或治疗。

2. 缺氧诱导是关键：检测HIF-1α蛋白表达时，必须设置缺氧处理组或使用蛋白酶体抑制剂（如MG132），否则常氧下信号极低，易导致假阴性。

3. 样品制备：细胞裂解液中需加入蛋白酶抑制剂混合物及去泛素化酶抑制剂（如NEM），防止HIF-1α降解。推荐在缺氧环境中直接裂解细胞。

4. 抗原修复必需：对于IHC/ICC-IF，石蜡切片或固定细胞必须进行热诱导抗原修复（枸橼酸盐pH 6.0，高压20分钟），否则核信号缺失。

5. 安全操作：叠氮钠有毒，操作时请佩戴手套。废液按有害物处理。

6. 对照设置：建议同时检测常氧与缺氧样本，以及使用HIF-1α siRNA敲低或VHL过表达细胞验证抗体特异性。

七、典型实验结果预期

Western Blot：在CoCl2（100 uM，4小时）或低氧（1% O₂，6小时）处理的HeLa细胞裂解液中，1:5000稀释抗体可检测到约110 kDa的清晰条带；常氧对照无条带或极弱。

Immunoprecipitation：从缺氧处理的HEK293核提取物中，6 ug抗体/mg蛋白可沉淀HIF-1α，洗脱物WB检测到预期条带，同时可检测到共沉淀的HIF-1β。

IHC：人肾透明细胞癌（常伴VHL失活，HIF-1α组成性稳定）FFPE切片显示弥漫性核强阳性；癌旁正常肾组织核阴性。

ICC-IF：低氧处理的HeLa细胞呈现明亮的核内点状或均质荧光；常氧细胞仅微弱胞浆背景。