武汉艾美捷科技有限公司

一、产品概述

GAPDH（甘油醛-3-磷酸脱氢酶）是糖酵解途径中的关键酶，同时参与多种非代谢功能，如囊泡运输、DNA修复和tRNA输出。由于其在大多数细胞和组织中稳定高表达，GAPDH被广泛用作蛋白质印迹和免疫组织化学实验中的内参对照。由艾美捷代理Bethyl Laboratories推出的本产品（A300-641A）为针对人GAPDH蛋白中部区域的兔多克隆抗体，经抗原亲和纯化，可同时识别人和小鼠来源的GAPDH。产品适用于免疫组织化学（IHC）和蛋白质印迹（WB），提供明确优化的工作条件，是蛋白表达定量和细胞代谢研究的可靠内参工具。

二、关键规格

参数 | 详细信息

靶标 | GAPDH

反应性 | 小鼠、人

应用 | IHC, WB

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

形式 | 完整IgG

免疫原 | 第225–275位氨基酸区域

同型 | IgG

偶联物 | 未偶联

纯度 | 抗原亲和纯化

抗原种属 | 人

浓度 | 200 ug/ml

保存条件 | 2 – 8 °C

有效期 | 收货后1年

缓冲液 | Tris缓冲盐水，含0.1% BSA和0.09%叠氮化钠

三、分子生物学背景

GAPDH（基因名GAPDH，Gene ID 2597，Uniprot P04406）是糖酵解途径的核心酶，催化甘油醛-3-磷酸在NAD⁺和无机磷酸存在下氧化磷酸化为1,3-二磷酸甘油酸。这一反应产生高能磷酸化合物并生成NADH，是细胞能量代谢的关键步骤。

除经典代谢功能外，GAPDH已被证实参与多种非糖酵解过程：

囊泡运输：与微管和微丝相互作用，参与胞内运输。

DNA修复与复制：可进入细胞核，参与碱基切除修复和DNA复制。

细胞骨架调控：与肌动蛋白丝结合，影响细胞形态和运动。

tRNA输出：在细胞核内与tRNA结合，协助其核质运输。

GAPDH的分子量约为36–38 kDa，在几乎所有组织和细胞类型中持续高表达，且在不同实验条件下表达水平相对稳定，因此被广泛用作Western Blot和IHC的上样对照或内参。

别称：G3PD、GAPD、衰老相关基因9蛋白、附睾分泌性精子结合蛋白Li 162eP、Oct1共激活因子p38组分、肽基半胱氨酸S-亚硝基化酶等。

四、储存与稳定性

抗体以200 ug/ml浓度提供于Tris缓冲盐水（TBS）中，含0.1% BSA（牛血清白蛋白）作为稳定剂，以及0.09%叠氮化钠作为防腐剂。BSA的添加有助于防止低浓度抗体在储存过程中的非特异性吸附和活性损失。收到后请于2–8°C条件下垂直保存，切勿冷冻。冷冻会导致蛋白变性和聚集。在正确储存条件下，自收货之日起可稳定保存1年。

重要提示：叠氮化钠会抑制辣根过氧化物酶（HRP）活性。若后续使用HRP偶联二抗进行化学发光检测，请确保洗涤步骤充分。由于本抗体浓度较低（200 ug/ml）且含BSA，不建议采用脱盐或透析去除叠氮化钠（会导致抗体过度稀释），应通过充分洗涤（3–5次，每次5–10分钟）来消除其影响。

五、应用与推荐工作条件

蛋白质印迹（WB）

推荐稀释范围：1:2000 – 1:10,000

封闭与抗体稀释液：5%脱脂牛奶-TBST

一抗孵育：过夜孵育（推荐4°C）

推荐二抗：山羊抗兔IgG（重链+轻链）抗体（货号A120-101P）

六、性能特点：

GAPDH在常见细胞裂解液（如HeLa、HEK293T、NIH/3T3）中表达丰度很高，通常仅需5–15 ug总蛋白即可获得强信号。

推荐起始稀释度为1:5000。若信号过强（出现饱和或背景弥散），可提高至1:10,000；若信号偏弱（罕见），可降至1:2000。

由于本抗体浓度为200 ug/ml，较常规1000 ug/ml抗体低，使用时请注意稀释计算：例如1:5000稀释时，每10 ml工作液需2 ul抗体原液。

七、优化建议

上样量：建议上样5–20 ug总蛋白。过高的上样量可能导致内参信号饱和，无法准确校正目标蛋白。

曝光时间：由于GAPDH丰度高，化学发光曝光时间通常很短（数秒至1分钟），注意避免过曝导致条带合并。

本抗体凭借其人鼠跨物种反应性、多应用兼容性（IHC/WB）以及优化的实验条件，是蛋白表达定量、代谢研究及组织定位中可靠的内参工具。