武汉艾美捷科技有限公司

一、产品概述

DDX6（DEAD-box解旋酶6）是DEAD-box RNA解旋酶家族的成员，在RNA代谢的多个环节中发挥核心作用，包括mRNA降解、翻译调控及核糖核蛋白复合物组装。由艾美捷代理Bethyl Laboratories推出的本产品（A300-461A）为针对人DDX6蛋白C端区域的兔多克隆抗体，经抗原亲和纯化，可同时识别人和小鼠来源的DDX6，适用于免疫组织化学（IHC）、免疫沉淀（IP）和蛋白质印迹（WB）。抗体识别表位位于DDX6第425–483位氨基酸（接近C末端），具有极高的检测灵敏度，WB推荐稀释度高达1:25,000–1:50,000。

二、关键规格

参数 | 详细信息

靶标 | DDX6

反应性 | 小鼠、人

应用 | IHC, IP, WB

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

形式 | 完整IgG

免疫原 | 第433位至C末端区域

同型 | IgG

偶联物 | 未偶联

纯度 | 抗原亲和纯化

抗原种属 | 人

浓度 | 1000 ug/ml

保存条件 | 2 – 8 °C

有效期 | 收货后1年

缓冲液 | Tris-柠檬酸盐/磷酸盐缓冲液，pH 7-8，含0.09%叠氮化钠

三、分子生物学背景

DDX6（Gene ID 1656，Uniprot P26196）是DEAD-box解旋酶家族的特征成员，其名称来源于高度保守的DEAD（Asp-Glu-Ala-Asp）氨基酸基序。该家族蛋白的主要功能是作为ATP依赖的RNA解旋酶，利用ATP水解释放的能量重塑RNA二级结构或RNA-蛋白质相互作用。

DDX6参与RNA代谢的全过程，包括：

pre-mRNA剪接：协助剪接体复合物的组装与重排

RNA合成与降解：在mRNA衰变途径（如无义介导的降解）中发挥作用

RNA输出与翻译：调控mRNA从细胞核向细胞质的转运及翻译起始效率

核糖核蛋白（RNP）复合物组装：参与P小体（processing bodies）的形成，介导mRNA的暂时储存或降解

研究表明，DDX6通过翻译水平调控基因表达，正向调节细胞生长。其异常表达与多种肿瘤发生相关，故又称癌基因RCK。DDX6的分子量约为54 kDa，别名包括：ATP依赖性RNA解旋酶p54、DEAD box蛋白6、HLR2、P54等。

四、储存与稳定性

抗体以1000 ug/ml浓度提供于Tris-柠檬酸盐/磷酸盐缓冲液（pH 7-8）中，含0.09%叠氮化钠作为防腐剂。收到后请于2–8°C条件下保存，严禁冷冻。反复冻融会导致蛋白变性和聚集，降低抗体效价。在正确储存条件下，自收货之日起可稳定保存1年。

注意：叠氮化钠对HRP活性有抑制作用。若后续使用HRP偶联二抗进行化学发光检测，务必确保洗涤充分；如需彻底去除叠氮化钠，可使用脱盐柱或透析。

应用与推荐工作条件

蛋白质印迹（WB）

推荐稀释范围：1:25,000 – 1:50,000（超高灵敏度）

封闭与抗体稀释液：5%脱脂牛奶-TBST

一抗孵育：过夜孵育（推荐4°C）

标准二抗：山羊抗兔IgG（重链+轻链）抗体（货号A120-101P）

免疫沉淀后WB的特殊要求：  

当检测免疫沉淀产物中的DDX6时，为避免免疫沉淀抗体重链（约55 kDa）与DDX6（约54 kDa）分子量重叠造成的信号干扰，推荐使用抗兔IgG轻链HRP偶联抗体进行检测，并在封闭缓冲液中加入5%正常猪血清（货号S100-020）。轻链特异性二抗仅识别约25 kDa的轻链，可完全排除重链区域的假阳性或遮盖效应。

免疫沉淀（IP）

推荐用量：6 ug抗体 / mg细胞裂解液

标准IP流程：

1. 使用非变性裂解缓冲液（如含150 mM NaCl、1% NP-40、50 mM Tris-HCl pH 7.4，添加蛋白酶抑制剂）制备细胞裂解物。

2. 取1 mg总蛋白裂解液，加入6 ul本抗体（1000 ug/ml即1 ug/ul）。

3. 4°C旋转孵育过夜（12–16小时）。

4. 加入20–30 ul Protein A琼脂糖珠，继续4°C孵育2–4小时。

5. 用裂解缓冲液洗涤琼脂糖珠3–5次。

6. 加入SDS上样缓冲液煮沸变性，进行WB检测。

免疫组织化学（IHC）

推荐稀释范围：1:1000 – 1:5000

抗原修复：推荐使用Tris-EDTA缓冲液（pH 9.0）进行热诱导抗原修复

样本类型：福尔马林固定石蜡包埋（FFPE）组织切片

IHC操作提示：

脱蜡和水化后，将切片置于Tris-EDTA缓冲液（pH 9.0）中，使用高压锅或微波炉进行热修复（95–100°C，15–20分钟）。

自然冷却至室温后，进行封闭（如5%正常山羊血清或BSA）。

一抗在推荐稀释范围内进行滴定，建议从1:2000开始摸索最佳条件。

本抗体凭借其超高的检测灵敏度（WB高达1:50,000）、跨物种反应性（人/小鼠）以及多应用兼容性（IHC/IP/WB），是研究RNA代谢、翻译调控、P小体功能以及DDX6相关肿瘤发生机制的理想工具。