武汉艾美捷科技有限公司

在天然免疫与适应性免疫调节研究中，CpG寡脱氧核苷酸（ODN）作为模拟细菌DNA免疫刺激效应的合成分子，已成为疫苗佐剂、免疫保护剂及抗过敏剂开发的重要工具。其中，ODN 2006是CpG-B类（亦称K型）ODN的原型分子，以其全硫代磷酸酯（PS）骨架和强效的B细胞活化能力而著称。本文基于产品技术资料，系统介绍由艾美捷代理的Hycult品牌推出的CpG-B DNA (ODN 2006)（货号：HC4039）的分子特性、作用机制、免疫学功能及实验室应用规范。

一、产品概述与分子结构

ODN 2006是一条长度为24个核苷酸的单链DNA序列，其具体序列为：5′-tcgtcgttttgtcgttttgtcgtt-3′。其中，小写字母代表硫代磷酸酯（PS）骨架连接，粗体字母表示CpG二核苷酸（胞嘧啶-磷酸-鸟嘌呤）基序。全链采用PS修饰骨架，该修饰可有效抵抗核酸酶的降解，显著提升分子在体内外的稳定性，延长半衰期。

每瓶产品提供约200 nmol的冻干纯化24-mer CpG ODN，具体含量标注于瓶身标签。内毒素水平检测为阴性（未检出），确保实验体系不受内毒素干扰。

二、作用机制：TLR9介导的免疫激活

脊椎动物免疫系统通过模式识别受体（PRR）识别病原体相关分子模式。细菌DNA中非甲基化的CpG基序可被Toll样受体9（TLR9，又称CD289）识别。ODN 2006作为CpG基序的合成模拟物，能够直接结合TLR9，进而启动下游信号级联反应，包括丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）通路和核因子κB（NF-κB）通路的激活，最终诱导多种免疫细胞的活化与细胞因子的产生。

在细胞分布上，人类TLR9主要表达于B细胞和浆细胞样树突状细胞（PDC）；小鼠的TLR9还表达于髓系细胞。不同物种对CpG ODN的最佳序列存在差异，ODN 2006的序列设计兼顾了人和小鼠的免疫激活能力，可跨物种调节免疫应答。

三、CpG-B类ODN的免疫学特征

根据结构和对免疫应答的影响，CpG ODN可分为三类：CpG-A（D型）、CpG-B（K型）和CpG-C。其中，CpG-B类具有以下典型特征：

骨架结构：全硫代磷酸酯骨架，含一个或多个CpG基序，不含poly-G序列。

免疫效应：弱诱导I型干扰素（IFN-α）产生，但作为Th1型佐剂效能极强，且是强效的B细胞应答刺激剂。

细胞作用：促进单核细胞来源的树突状细胞和浆细胞样树突状细胞的存活、活化与成熟。

ODN 2006作为CpG-B的原型，能够高效激活B细胞增殖、分化及抗体产生，同时协同诱导Th1型细胞免疫应答。

四、应用领域与实验操作指南

1、主要应用

功能研究：在体外生物测定中用于激活细胞，研究TLR9信号通路及CpG介导的免疫调节机制。

免疫调节剂：作为疫苗佐剂、抗过敏剂或免疫保护剂的候选分子，用于增强特异性免疫应答或调节免疫耐受与自身免疫。

2、使用浓度与优化

在体外刺激实验中，推荐起始浓度范围为0.05至3 uM。由于不同细胞类型、培养条件及检测终点可能影响最佳浓度，建议使用者通过预实验进行梯度滴定，确定最适合自身实验体系的浓度。

3、配制与储存

1. 复溶：用无菌蒸馏水或去离子水溶解冻干粉末，具体体积根据所需工作浓度计算。建议制备较高浓度的储备液（如100 uM或更高）。

2. 分装保存：复溶后的储备液应分装于无核酸酶的微量离心管中，储存于-20℃。避免反复冻融，否则会导致活性下降。

3. 冻干品保存：未开封的冻干产品应储存于4℃。在推荐的储存条件下，产品稳定性可维持一年。

本产品仅用于研究用途，不得用于人体、动物或诊断目的。

五、质量控制与安全性

每批产品均经过严格的质量控制，内毒素水平检测为阴性，排除了内毒素对细胞活化实验的干扰。产品为纯化的24-mer CpG ODN，经HPLC或类似方法纯化，确保序列准确性和纯度。

六、总结

ODN 2006作为一种经典的CpG-B型寡脱氧核苷酸，凭借其全硫代磷酸酯骨架、明确的TLR9靶向机制和强效的B细胞/树突状细胞活化能力，已成为免疫学、疫苗学及感染性疾病研究中的核心工具分子。规范的操作流程——包括正确的复溶、分装储存及浓度优化——是保证实验数据可靠性的基础。在应用时，研究者应结合具体实验目的（如细胞因子检测、抗体应答分析或佐剂效应评估）调整使用方案，以充分发挥其在免疫调节研究中的潜力。