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发布人:上海优宁维生物科技股份有限公司
发布日期:2026/3/31 11:44:02
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His 标签蛋白纯化:IMAC 技术实操要点与树脂选型指南
2026/09/29
His‑tag 蛋白纯化核心原理 His‑tag 一般由 6‑10 个组氨酸残基构成,可融合在目标蛋白 N 端或 C 端。标签能够和 Ni²⁺、Co²⁺等金属离子发生特异性螯合作用。在金属亲和层析(IMAC)过程中,结合金属离子的固相树脂捕获带有 His 标签的目标蛋白,杂蛋白不发生结合,通过洗涤步骤去除,再依靠咪唑竞争结合实现目标蛋白洗脱,完成蛋白分离富集。 常用 IMAC 树脂选型
蛋白纯化柱:蛋白分离纯化的核心实验耗材
主流蛋白纯化柱类型及应用场景 亲和柱依靠特异性相互作用捕获目标蛋白,是蛋白初步富集常用类型。针对 6×His 标签、MBP 标签等标签融合蛋白,可选择对应标签适配的亲和柱完成粗纯;部分亲和柱可结合蛋白与核酸的相互作用,用于转录因子、核酸酶类蛋白分离。 离子交换柱依靠分子电荷差异实现分离,多用于纯化流程中间步骤。分为强阳离子交换与强阴离子交换两大类别,通过调节缓冲液盐浓度,完成不同组分蛋白的分级
蛋白纯化完整流程实操科普
蛋白纯化完整流程拆解 完整的蛋白纯化主要分为样品前处理、捕获纯化、中度纯化、精细精制、样品浓缩保存五大环节。 样品前处理,是纯化的基础。菌体裂解之后,通过离心、超滤等方式去除细胞碎片、杂质,获取澄清上清。这一步很容易出现样品损失,大体积、多样本的样品,选择合适的超滤浓缩方案,能够有效改善回收率偏低的问题,同时建立标准化清洗保存 SOP,延长耗材使用寿命。 捕获阶段,核心目的快速富集目标蛋白