武汉艾美捷科技有限公司

BAK1（油菜素类固醇不敏感1相关受体激酶1）在没有病原体或诱导子的情况下控制与先天免疫相关的基因的表达。磷酸化Brl1。参与程序性细胞死亡（PCD）。亚细胞定位：细胞膜。替代名称：黄甾体类杀虫剂1相关受体激酶1、BAK1、BRI-1相关受体激酶、RKS10、受体激酶样SERK 10、SERK3、体细胞胚胎发生受体样激酶3、ELG、ELONGATED、ATSERK3、体细胞胚发生受体样酶3、ATBAK1。

艾美捷BAK1|β-胆固醇不敏感受体激酶1：

货号：AS12-1858

免疫原：与KLH偶联的肽段，来源于拟南芥Bak1序列，TAIR编号：AT4G33430，UniProt编号：Q94F62。

宿主：兔子

克隆性：多克隆

纯度：免疫原亲和纯化的血清，溶于pH 7.4的磷酸盐缓冲液（PBS）中。

形式：冻干

数量：50 µg

复溶：复溶时加入50 µl无菌水。

储存：冻干品/复溶后储存于-20°C；复溶后请分装保存，避免反复冻融。打开前请短暂离心管子，以避免因物质粘附在管盖或管壁上而导致的损失。

测试应用：免疫沉淀（IP）、西方印迹（WB）

推荐稀释度：2 µl/50 µl蛋白G琼脂糖，1:5000（WB）

预期 | 表观分子量：68 | 70 kDa

确认的反应性：拟南芥、番茄

预测的反应性：盐芥

未反应的：大麦、生菜、本氏烟、水稻

应用举例：

图：正确蛋白质提取方法对检测BAK1目标条带的贡献示例

蛋白质提取方法

#1 约100 mg植物材料在1.5 ml离心管中，用0.2 ml匀浆缓冲液（0.1 M EDTA、0.12 M Tris-HCl，pH 6.8、4% SDS、10%甘油、10% 2-巯基乙醇）与柱塞和少量沙子混合。再加入0.8 ml缓冲液，充分混合。通过14,000 rpm离心去除杂质。上清液与2x SDS上样缓冲液混合后在95°C下煮沸10分钟。（未检测到BAK1条带）

#2 约200 mg植物材料在研钵中用液氮研磨，收集至2.0 mL微量离心管中。加入0.2 ml 2x SDS上样缓冲液（0.125 M Tris-HCl，pH 6.8、10% 2-巯基乙醇、4% SDS、10%蔗糖、0.004% BPB），涡旋混合2分钟，95°C煮沸10分钟。通过14,000 rpm离心去除杂质后收集上清液。（可视化BAK1条带）

西方印迹操作

30 µL样品在10% SDS-PAGE上分离，并使用Bio-Rad Trans-Blot Turbo Transfer System将蛋白转印至Trans-Blot Turbo Mini PVDF Transfer Packs，转印时间为7分钟。膜在室温下用4%脱脂奶粉（TBS-T）封闭1小时，期间不断搅拌。膜在室温下用一抗（稀释度1:2000，4%脱脂奶粉，TBS-T）孵育1小时，期间不断搅拌。弃去抗体溶液后，膜用TBS-T洗涤3次，每次5分钟，期间不断搅拌。膜在室温下用山羊抗兔IgG（H&L），辣根过氧化物酶偶联（AS09 602，Agrisera）孵育1小时，稀释度为1:2000，期间不断搅拌。膜用TBS-T洗涤3次，每次15分钟，期间不断搅拌，并用Agrisera ECL SuperBright显色5分钟。曝光时间为1分钟。

其他信息：

抗体可结合AtBAK1-Myc，但不与AtSOBIR发生交叉反应。

附加信息：

如果需要，该产品可以含有Proclin。

关于CE提取缓冲液的额外信息：CE缓冲液不需要每次都新鲜配制。分装后可保存在-20°C。Na₂MoO₄和NaF是磷酸酶抑制剂，用于防止提取过程中目标蛋白的磷酸化形式丢失。EDTA螯合金属离子，从而抑制许多需要金属离子作为辅因子的酶，并抑制蛋白酶的活性。蛋白酶抑制剂混合物是Sigma编号P9599，稀释比例为1:100。

抗体可在总提取物中识别AtBAK1-Myc。

BAK1|β-胆固醇不敏感受体激酶1文献参考：

Lee et al. (2024). Reprogramming of flagellin receptor responses with surrogate ligands. Nat Commun. 2024 Nov 12;15(1):9811.doi: 10.1038/s41467-024-54271-5.  

Jing et al. (2024). Copine proteins are required for brassinosteroid signaling in maize and Arabidopsis. Nat Commun. 2024 Mar 8;15(1):2028.doi: 10.1038/s41467-024-46289-6.  

Xu et al. (2022) The Phloem Intercalated With Xylem-Correlated 3 Receptor-Like Kinase Constitutively Interacts With Brassinosteroid Insensitive 1-Associated Receptor Kinase 1 and Is Involved in Vascular Development in Arabidopsis. Front Plant Sci. 2022 Jan 11;12:706633. doi: 10.3389/fpls.2021.706633. PMID: 35087541; PMCID: PMC8786740.

https://www.amyjet.com/products/AS12-1858.shtml