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KLH IgM(小鼠)ELISA试剂盒：KLH IgM（小鼠）ELISA试剂盒用于定量测量血浆和血清中的KLH IgM。

 

艾美捷KLH IgM(小鼠)ELISA试剂盒：

货号：KA2461

校准范围：6.25至100 µg/mL

适用样本：血浆、血清

样本体积：100 µL

标记：HRP结合物

检测方法：比色法

监管状态：仅供研究使用（RUO）

测定类型：定量

反应性：小鼠

应用：定量

储存说明：将冻干标准品储存于-20℃。将所有其他组分储存于4℃。

仅供研究使用（RUO）

 

KLH IgM(小鼠)ELISA试剂盒检测原理：

KLH IgM（小鼠）ELISA试剂盒基于固相酶联免疫吸附试验（ELISA）。该测定使用KLH进行固相（微量滴定孔）固定和辣根过氧化物酶（HRP）偶联用于检测抗小鼠IgM抗体。将测试血清或血浆样本稀释并在微量滴定孔1小时。随后洗涤微量滴定孔，加入HRP缀合物孵育45分钟。因此，抗KLH IgM分子夹在固定的KLH和检测抗体偶联物。然后洗涤孔以去除未结合的HRP标记抗体，以及加入TMB试剂，在室温下孵育20分钟。这导致了蓝色。通过添加终止溶液来停止显色；将颜色更改为黄色。光学在450nm处用分光光度法测量密度。抗KLH IgM的浓度与测试样品的光密度。

 

使用注意事项：

✓ 仅供研究使用，不用于诊断目的。

✓ 在使用试剂盒之前，请仔细阅读并理解说明书。

✓ 本试剂盒设计用于测量免疫后5天收集的血清中的抗KLH IgM水平。免疫后超过5天收集的血清可能含有高水平的抗KLH IgG，这些IgG会与抗KLH IgM竞争固定化的KLH，从而造成干扰。

✓ 所有试剂在使用前应放置至室温（25℃）。

✓ 应通过实验确定最佳样本稀释度。然而，我们建议初次稀释样本500倍。请勿使用小于25倍的稀释度。

✓ 如果在每个步骤中，试剂在5分钟内加入微孔板的孔中，则可获得最佳结果。

✓ 操作限制

• 当按照上述详细说明完整理解并执行测定程序时，将获得可靠且可重复的结果。

• 洗涤步骤至关重要。洗涤不足会导致精密度差和吸光度读数虚高。

 

试剂准备：

✓ 洗涤液准备

提供的洗涤液为20倍浓缩液。使用前，将瓶中内容物（50 mL）用950 mL蒸馏水或去离子水稀释。

✓ 标准品准备

小鼠抗KLH IgM标准品为冻干储备液。按照瓶签上的说明复溶储备液。

标记5个聚丙烯或玻璃管，分别为100、50、25、12.5和6.25 µg/mL。

按照储备瓶标签上的详细说明，在标记为100 µg/mL的管中准备100 µg/mL的标准品。

将稀释液250 µL分别加入剩余的管中。

通过将100 µg/mL标准品250 µL与标记为50 µg/mL的管中的250 µL稀释液混合稀释，制备50 µg/mL的标准品。

同样通过连续稀释法制备25、12.5和6.25 µg/mL的标准品。

 

样本准备：

一般说明：抗KLH IgM存在于KLH免疫小鼠的血清中，浓度约为10,000 µg/mL。为了获得在标准曲线范围内的数值，我们建议样本初次稀释500倍，使用以下程序对每个待测样本进行操作：

分别向不同的管中加入48 µL和237.5 µL稀释液。

将2 µL血清/血浆样本加入含有48 µL稀释液的管中，混匀。这提供了25倍稀释的样本。

将12.5 µL 25倍稀释的样本与第二管中的237.5 µL稀释液混合。这提供了样本的500倍稀释。

对每个待测样本重复此程序。

 

典型标准曲线：

下图展示了以450 nm处的吸光度读数为Y轴，抗KLH IgM浓度为X轴的典型标准曲线。该曲线仅用于说明目的，不应用于计算未知数。

 

KLH IgM(小鼠)ELISA试剂盒文献参考：

1. Low-dose influenza vaccine Grippol Quadrivalent with adjuvant Polyoxidonium induces a T helper-2 mediated humoral immune response and increases NK cell activity. Vladimir Talayev, Irina Zaichenko, Maria Svetlova, Alexei Matveichev, Olga Babaykina, Elena Voronina, Andrei Mironov. Vaccine. 2020 Sep 29;38(42):6645-6655. doi:10.1016/j.vaccine.2020.07.053.

2. Pancreatic lipase-related protein 2 is responsible for the increased hepatic retinyl ester hydrolase activity in vitamin A-deficient mice. Gao Y, Lu W, Sun Q, Yang X,Liu J, Ge W, Yang Y, Zhao Y, Xu X, Zhang J. FEBS J.2019 Jun 14. [Epub ahead of print]

 

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