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TNF样配体1A（TL1A）响应型荧光素酶报告基因Jurkat细胞系是一种TL1A响应型的DR3/NF-kB荧光素酶报告基因Jurkat细胞系，表达由NF-kB响应元件控制的荧光素酶，并稳定表达人类DR3（死亡受体3；TNFRSF25；NM_003790.3）。荧光素酶报告基因的表达由位于最小TATA启动子上游的NF-kB响应元件驱动。可以通过测量荧光素酶活性来监测DR3配体TL1A（TNF样蛋白1A；TNFSF15）激活NF-kB信号通路的情况。该细胞系已验证对TL1A和TNF-α刺激有响应。TL1A刺激可被中和性抗TL1A抗体（#101729）和DcR3（诱饵受体3）阻断。

背景

TNF样配体1A（TL1A，也称为血管内皮生长抑制因子，VEGI或TNFSF15）是一种抗血管生成细胞因子。它是炎症的重要介质，通过与其受体DR3（死亡受体3）结合，激活下游信号，参与先天和适应性免疫稳态。许多研究表明，可以在T细胞介导的自身免疫疾病如类风湿性关节炎、银屑病性关节炎和炎症性肠病患者的血清中检测到可溶性TL1A。此外，最近的临床研究表明，抗TL1A抗体治疗是炎症和自身免疫性疾病治疗的有希望的方法。

艾美捷TL1A响应型荧光素酶报告基因Jurkat细胞系（#BPS-78811）的应用：

• 表征可溶性TL1A活性。

• 在基于细胞的检测格式中筛选抗TL1A抗体。

细胞培养协议

注意：Jurkat细胞源自人类材料，因此建议采取适当的安全预防措施。

细胞解冻

1. 从液氮储存中取出一个细胞瓶。在准备解冻前保持在干冰上。

2. 准备解冻时，在37°C水浴中大约60秒旋转冷冻细胞瓶。一旦细胞解冻（可能比60秒稍快或稍慢），迅速将瓶中全部内容转移到一个空的50毫升圆锥管中。

注意：在37°C水浴中放置细胞过久将导致活性迅速丧失。

3. 使用10毫升血清学移液管，缓慢向含有细胞的圆锥管中逐滴加入10毫升预热的解冻培养基2，同时轻轻摇晃圆锥管以实现温和混合，避免渗透冲击。

4. 立即以300 x g的速度离心细胞5分钟，去除培养基，并将细胞在5毫升预热的解冻培养基2中重悬。

5. 将重悬的细胞转移到T25瓶中，并在37°C、5% CO2培养箱中培养。

6. 在培养24小时后检查细胞活性。对于T25瓶，加入3-4毫升解冻培养基2，并继续在37°C、5% CO2培养箱中培养，直到细胞准备好传代。

7. 细胞应在达到2 x 10^6细胞/毫升的密度之前传代。在第一次传代及后续传代中，使用生长培养基2A。

细胞传代

在细胞达到2 x 10^6细胞/毫升的密度之前，但在0.2 x 10^6细胞/毫升的密度以上时，将细胞悬浮液稀释到新的培养容器中，使用生长培养基2A。所用的传代比例应保持细胞在0.2 x 10^6到2 x 10^6细胞/毫升之间。

细胞冷冻

1. 以300 x g的速度离心细胞5分钟，去除培养基，并在4°C细胞冷冻培养基（BPS Bioscience #79796）中将细胞团重悬至约2 x 10^6细胞/毫升的密度。

2. 将1毫升细胞悬浮液分装到每个冷冻瓶中。将瓶子放置在绝缘容器中缓慢冷却，并在-80°C下储存过夜。

3. 次日将瓶子转移到液氮中长期储存。

注意：建议扩展细胞并至少冷冻10个早期传代的瓶子以备将来使用。

验证：

图：亲本NF-kB荧光素酶报告基因Jurkat细胞系（NF-κB Jurkat）和TL1A响应型荧光素酶报告基因Jurkat细胞系（DR3/NF-kB Jurkat）中的DR3蛋白表达。细胞裂解后，通过SDS-PAGE电泳分析人类DR3表达水平，随后使用DR3重组单克隆抗体（11H6L9）（ThermoFisher #702277）进行Western Blotting。使用β-Actin（13E5）兔mAB（Cell Signaling #4970）作为装载对照。

TL1A响应型荧光素酶报告基因Jurkat细胞系文献参考：

Xu WD, et al., 2022 Front. Immunol. 13: 891328

https://www.amyjet.com/products/BPS-78811.shtml