武汉艾美捷科技有限公司

Immunoscan CCPlus® 试剂盒是一种酶联免疫吸附测定（ELISA），用于定性和半定量测定人血清中针对环状瓜氨酸化肽（CCP）的IgG抗体。该测定用于检测单个血清样本中的抗体。该测定的结果不得用于临床诊断或患者管理。分析应由训练有素的实验室专业人员执行。仅限研究使用。不得用于诊断程序。

 

总结和解释

类风湿性关节炎（RA）是最常见的系统性自身免疫疾病之一。这种影响全球人口高达1-2%的疾病的病因尚不明确。RA的诊断主要依赖于疾病的临床表现。目前常规使用的唯一的血清学检测是测定血清中类风湿因子（RF）的存在。RF是针对IgG类免疫球蛋白的恒定区域的抗体。然而，这些抗体在其他自身免疫疾病、感染以及高达15%的健康个体中也存在相对较高的比例。

在RA患者的血清中也发现了更具特异性的抗体（见（1）概述）。据报道，大约50%的RA患者存在抗过核因子（APF）抗体，特异性超过70%（2）。描述了一些与角蛋白或其他已知蛋白质无关的环状合成肽，这些肽能被RA患者血清中的自身抗体特异性识别（3）。这些肽随后被用于EIA检测RA特异性自身抗体（3）。临床评估研究表明，EIA在大量明确定义的RA患者血清中呈阳性，对疾病对照具有极高的特异性（3-8）。在早期RA中，针对关节受累和放射学损伤的抗环状瓜氨酸化肽（anti-CCP）抗体的测量发现了诊断和预后价值（7, 9-14）。在临床症状发展前几年就可以检测到抗-CCP抗体（14）。一项前瞻性队列研究表明，93%的抗CCP阳性的未分化关节炎患者最终发展为类风湿性关节炎，显示了这些抗体的强大阳性预测价值（14）。

Svar Life Science的Immunoscan CCPlus®测定基于含有瓜氨酸残基的高纯度合成肽。这种抗CCP试剂盒包含了基于在检测RA自身抗体方面更优越的性能而选择的改进型合成肽（8-14）。

 

艾美捷环瓜氨酸肽(CCP)IgG抗体检测试剂盒（IMMUNOSCAN CCPlus）（#RA-96Plus）的测定原理：

抗CCP抗体试剂盒基于ELISA方法。测试使用的微孔板孔内涂有瓜氨酸化的合成肽（抗原）。将稀释的血清样本应用于孔中并孵育。如果存在特异性抗体，它们将与孔中的抗原结合。未结合的物质被洗涤掉，通过添加辣根过氧化物酶（HRP）标记的抗人IgG来检测任何结合的抗体，随后进行第二次洗涤和与底物的孵育。反应性抗体的存在将导致颜色的发展，这与结合抗体的数量成正比，并通过光度测定法确定。

 

注意事项：

仅限研究使用。不得用于诊断程序。

1. 终止液含有0.5 M硫酸。不要使试剂接触到皮肤。

2. 避免所有生物材料与皮肤和粘膜接触。

3. 不要口吸移液。

4. 对照和校准器含有人源血清。尽管已针对HIV 1+2、HCV、HbsAg和HIV-1 Ag进行检测并确认为阴性，但这些材料必须被视为潜在感染性物质。-疾病控制和预防中心以及国立卫生研究院建议在生物安全二级水平处理潜在感染性因子。

5. TMB（3,3',5,5'-四甲基联苯胺）通过吸入、皮肤接触和吞咽是有毒的。处理底物时要小心。

6. 不要使用过期的组分，不要混用不同批次的组分。

7. 每个孔最终用作光学比色皿。因此，不要触摸孔的下表面，防止损坏和污垢。

8. 严格遵守本协议将获得最佳结果。在整个过程中仔细移液和洗涤是保持精度和准确性的必要条件。

9. 对照、校准器和稀释缓冲液含有0.09%的叠氮钠。

10. 有报道称叠氮钠可能与管道中的铅和铜反应形成爆炸性化合物。处置时，用水冲洗排水管以最小化金属叠氮化合物的积累。

Svar Life Science可以根据要求提供产品安全数据表。

 

试剂盒内容：

1个密封的（96孔）涂有CCP肽的微孔板。即用型。

5瓶含有校准器（阳性人血清池）（1.2 mL）。即用型（蓝色）。

1瓶含有参考对照人血清（1.2 mL）。即用型（蓝色）。

1瓶含有阳性对照人血清（1.2 mL）。即用型（蓝色）。

1瓶含有阴性对照人血清（1.2 mL）。即用型（蓝色）。

1瓶含有结合物溶液（过氧化物酶结合到抗人IgG抗体）（15 mL）。即用型（红色）。

1瓶含有底物溶液TMB（15 mL）。即用型。

2瓶含有稀释缓冲液（35 mL）。即用型（蓝色）。

1瓶含有终止液（15 mL）。即用型。

2瓶含有洗涤缓冲液（35 mL）20倍浓缩。

 

需要但未提供的物料或设备：

带有450 nm滤光片的酶标仪。

自动微孔板洗涤器。

 

处理和储存：

在+2°C至+8°C的暗处储存试剂盒。

不要使用过期的试剂。

建议在立即使用前打开密封的微孔板。

应避免直接光照在色素溶液上。

如果观察到第一校准器A（3200 U/mL）E450 nm <0.9的弱或缺失的颜色反应，则测试结果无效。

 

样品准备：

本测试在血清样本上进行。对于血清样本，允许凝血完全。在4-8°C下储存样本最多48小时。长时间储存时在-20°C下冷冻。稀释样本1:50。（将10 µL样本与490 µL稀释缓冲液混合。在测试中使用100 µL。（见测定方案）。

 

试剂的准备和处理：

在开始测试之前，应将微孔板和试剂放置至室温。在板达到室温之前不要打开板的密封。

使用前彻底混合试剂。

试剂盒中包含的试剂足够进行96次分析（包括校准器和对照分析）。

校准器和对照以双份分析。

缓冲液浓缩物可能含有盐晶体，应在室温（18-25°C）下溶解。

1. 使用后立即将所有试剂储存在2-8°C的暗处。

2. 涂有CCP肽的微孔板。即用型。

用带有干燥剂的铝箔重新密封剩余孔，并储存在2-8°C。

3. 洗涤缓冲液（35 mL）。洗涤缓冲液提供20倍浓缩。使用前准备稀释液。将35 mL洗涤缓冲液加入665 mL蒸馏水中并彻底混合。

4. 底物溶液TMB（15 mL）。即用型试剂。存放在暗处。

5. 稀释缓冲液（35 mL）。即用型。

6. 结合物溶液（15 mL）。即用型。

7. 终止液（15 mL）。即用型。

8. 校准器A-E（1.2 mL）。五个稀释的阳性人血清校准器，用相对单位表示。

校准器A含有3200 U/mL，B 800 U/mL，C 200 U/mL，

D 50 U/mL和E 25 U/mL。校准器即用型。

9. 参考对照（1.2 mL）。稀释的人血清，25 U/mL，即用型。

10. 阴性对照（1.2 mL）。稀释的人血清，即用型。

11. 阳性对照（1.2 mL）。稀释的人血清，即用型。

 

定性协议：

从含有对照和样本的孔的个别吸光度中减去孔A1和A2的平均吸光度值。

计算对照和每个样本的吸光度（光密度）比率。

 

环瓜氨酸肽(CCP)IgG抗体检测试剂盒（IMMUNOSCAN CCPlus）文献参考：

1. Van Boekel, M., Vossenaar, E., Van den Hoogen, F., Van Venrooij, W.Autoantibody systems in Rheumatoid Arthritis: specificity, sensitivity and diagnostic value.Arthritis Res. 4, 87-93 (2002).

2. Nienhuis, R. & Mandema, E.A new serum factor in patients with Rheumatoid Arthritis. The anti perinuclear factor.Ann. Rheum. Dis. 23, 302-305 (1964).

3. Schellekens, G., De Jong, B., Van den Hoogen, F., Van de Putte, L.,Van Venrooij, W.,Citrulline is an essential constituent of antigenic determinants recognized by Rheumatoid Arthritis-specific autoantibodies.Clin. Invest. 101, 273-281 (1998).

 

https://www.amyjet.com/products/RA-96Plus.shtml