武汉艾美捷科技有限公司

Advanced BioMatrix提供的PhotoCol甲基丙烯酸酯胶原蛋白克钌试剂盒，是一种纯化的甲基丙烯酰化I型牛胶原蛋白套件，它提供了具有独特可调属性的类似天然3D胶原蛋白凝胶，这些凝胶在不同浓度下制备并以可见光交联。

艾美捷PhotoCol甲基丙烯酸酯胶原蛋白克钌试剂盒（ABM-5271-1KIT）由纯化的甲基丙烯酰化I型牛胶原蛋白作为核心组分，以及套件中的其他支持试剂组成。

PhotoCol甲基丙烯酸酯胶原蛋白克钌试剂盒制备说明：

注意：在整个制备和处理胶原蛋白及其他溶液的过程中，要采用无菌操作以保持产品的无菌性。

注意：建议在制备胶原蛋白期间将胶原蛋白和其他工作溶液冷藏，并保持在冰上。

注意：在任何步骤中均不推荐使用涡旋混合器。

1. 向冻干的甲基丙烯酰化胶原蛋白中加入20 mM醋酸的体积（如下所示），以达到所需的浓度。推荐的浓度范围从3到8 mg/ml。

2. 在2-10°C的温度下，在摇床或旋转平台上混合，直至完全溶解，或过夜。尽可能避免形成气泡。

注意：较高浓度的胶原蛋白需要更长时间来溶解。

3. 确定所需的胶原蛋白体积。

4. 确定要与胶原蛋白混合的中和溶液（NS）的体积。为了达到Z终pH值7.0至7.4，按照表4或表5中的指南操作。注意：由于不同胶原蛋白浓度的粘度不同，以及通过移液管尖端的样品保持时间不同，称重与体积分配会有所差异。

5. 将所需的中和溶液（NS）体积转移到无菌容器或管中，并短暂冷藏。注意 - 如果中和溶液冷藏时间过长，盐分会从溶液中析出。

6. 如果需要光交联，通过将胶原蛋白和中和溶液的总体积乘以0.02来计算所需的每种光引发剂的体积。如果结果是100 ul，您将添加100 ul的钌和100 ul的过硫酸钠。

7. 在1X PBS或细胞培养基中，以37.4 mg/ml的浓度溶解所需的钌。

8. 在1X PBS或细胞培养基中，以119 mg/ml的浓度溶解所需的过硫酸钠。

9. 将计算出的钌光引发剂体积添加到中和溶液（NS）中，并彻底混合。

10. 将计算出的过硫酸钠光引发剂体积添加到胶原蛋白溶液中，并彻底混合。

11. 将冷藏的胶原蛋白/过硫酸钠总体积转移到冷藏的中和溶液/钌中。通过移液或旋转容器或管快速且彻底地混合。不要使用涡旋混合器。

注意：在整个过程中保持胶原蛋白混合物冷藏。

注意：检查确保pH值中性。由于这种材料的高粘度，可能更难混合。

12. 如果需要，将分散的冷藏细胞添加到胶原蛋白混合物中。通过移液或旋转容器或管快速且彻底地混合。

注意：如果担心气泡问题，可以让它在冰上静置，直到气泡上升到表面。

13. 将胶原蛋白混合物分配到所需的无菌板或培养容器中。

14. 在37°C下孵化超过30分钟以形成凝胶。

15. 如果需要交联，直接放置在400-450 nm的光源下。

注意：通过在具有良好光学特性且产生Z小光散射的玻璃底物上板凝胶，可以改善交联的一致性和保真度。

PhotoCol甲基丙烯酸酯胶原蛋白克钌试剂盒文献参考：

1. Gaudet, I. D., Characterization of MethacryatedType-I Collagen as a Dynamic PhotoactiveHydrogel, Biointerphases, 2012 Dec; 7(1): 25.

2. Drzewiecki K. E., Methacrylation Induces Rapid,Temperature-Dependent, Reversible Self-Assemblyof Type-I Collagen, Langmuir. 2014 Sep 23; 30(37):11204–11211.

https://www.amyjet.com/products/ABM-5271-1KIT.shtml