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艾美捷核糖核酸酶 A特异性和技术说明

发布人:武汉艾美捷科技有限公司

发布日期:2023/2/2 15:56:58

历史背景:

琼斯在1920年的工作通常被认为是胰腺核糖核酸酶的“开始”(Richards and Wycoff 1971)。RNase于1938年由Dubos和Thompson分离,并于1940年由Kunitz结晶。

 

1947年,沃辛顿成为家生产高度纯化的结晶RNase的公司。在1950年代初期,Armour公司制备了粗结晶酶,并以非常实惠的价格提供。在 1960 年代和 1970 年代,RNase A 是研究的最爱,主要是因为它非常热稳定,并且以高浓度存在于可访问的来源牛胰腺中。这些研究导致了晶体结构的阐明(Anfinsen 1959,Groves 1966和Scheraga 1967),氨基酸序列的测定(Smyth等人,1963),催化机制的鉴定(Beers 1960),以及折叠途径的澄清(Hantgan等人,1974)。RNase A是确定正确氨基酸序列的种酶和第三种蛋白质(Raines 1998)。

 

与RNase研究相关的工作获得了四项诺贝尔奖(Anfinsen,Moore,Stein和Merrifield)。大量的文献和大量的研究使RNase成为20世纪研究最广泛的酶(Raines 1998)。

 

最近的工作继续研究活细胞内质网中RNase的合成和成熟(Geiger等人,2010)。研究RNA酶的折叠和聚集也仍然有很多工作要做(Benito等人,2008年,Iwaoka等人,2008年,Arai 等人,2010年)。正在研究该酶在癌症发展和基因调控中的作用(Shlyakhovenko 2009),并且正在开发成癌症化疗剂(Chao等人,2010)。

 

艾美捷核糖核酸酶 A(WBC-LS003435)特异性:

RNase A对嘧啶核苷键具有特异性(Volkin和Cohn 1953)。反应被认为分两步进行。步,裂解3',5'-磷酸二酯键,同时生成2',3'-环磷酸二酯中间体。在第二步中,环磷酸二酯被水解成3'-单磷酸基团。步是关于底物的含氮碱的非特异性;然而,第二步对于末端为2',3'-环磷酸盐的嘧啶核苷酸是绝对特异性的。RNase B与RNase A对环胞苷酸和酵母RNA具有相同的特异性(Plummer和Hirs 1963)。RNase A显示出对较大底物的偏好(Nogués等人,1995)。

 

该酶在胞苷残基处的切割速度是尿苷残基的两倍(Richards和Wyckoff 1971)。Thr45被发现对介导嘧啶特异性最重要,既通过与嘧啶碱形成氢键,又在空间位上排除嘌呤碱(del Cardayré和Raines 1994)。Asp83的侧链对于稳定含尿苷底物裂解过程中的过渡态很重要;这种残留物对胞苷切割的动力学没有影响(del Cardayré和Raines 1995)。

 

核糖核酸酶 A(WBC-LS003435)技术说明:

应特别注意酶的处理,因为它与玻璃表面的亲和力。该酶保持活性,但在冻干时聚集,并在低离子强度的温度≥2°C的溶液中聚集。RNase A的加热溶液使DNA酶失活可能不令人满意,因为如果发生沉淀形成并且热处理的DNase可能会随着时间的推移重新激活,RNA酶活性可能会丧失。代码: RPDF 适用于需要最低 DNase 和蛋白酶水平且无需进一步处理的应用。代码: RAF在某些应用中无需处理即可使用。要热处理 RAF,请使用 10mM 乙酸盐 pH 5.0 和或不带 15mM CaCl 2 在 15°C 或更长时间下在 100°C 下 80 分钟。 如果在中性pH下加热,可能会沉淀。代码的热处理:由于磷酸盐的存在,RASE会沉淀。  

 

核糖核酸酶 A部分引用文献:

Alonso, J. , Nogues, M. and Cuchillo, C.

Modification of Bovine Pancreatic Ribonuclease A with 6-Chloropurine Riboside , Arch Biochem Biophys 246 , 681 , 1986

Alonso, J. , Paolillo, L. , D'Auria, G. , Nogues, M. and Cuchillo, C.

1H-n.m.r. Studies on the Existence of Substrate Binding Sites in Bovine Pancreatic Ribonuclease A , Int J Pept Protein Res 34 , 66 , 1989

Alonso, J. , Paolillo, L. , D'Auria, G. , Nogues, M. and Cuchillo, C.

1-H-n.m.r. Studies on the Specificity of the Interaction Between Bovine Pancreatic Ribonuclease A and Dideoxynucleoside Monophosphates , Int J Pept Protein Res 31 , 537 , 1988

 

来源:https://www.amyjet.com/products/WBC-LS003435.shtml

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