武汉艾美捷科技有限公司

关于支原体检测：

一般选择血清学检查、核酸检测可以检验支原体，具体如下：1、临床上对于支原体的检测主要是检测疑似感染者的血清学抗体，因为感染某种微生物以后人体会产生抗体；2、检验标本里的核酸，如果送检痰或者血、尿液里有支原体核酸，也可以认为有感染情况。支原体是一种介于细菌、病毒之间的微生物，个头比细菌稍微要小一点，但是比病毒大一些，可以透过滤菌器，在一般的培养基上培养不出来，需要特殊的培养基，这使得支原体检测存在很多困难。

艾美捷支原体检测试剂盒：

中文名称：支原体检测试剂盒

英文名字：Mycoplasma Detection Kit

编号：13100-01

规格：50Reactions

保存建议：-20℃可保存15个月，冻干粉重悬后需置于-20℃以下保存，避免反复冻融，如果每次进行检测的样本较少，请将三种试剂分装保存

艾美捷支原体检测建议的方案：

•试剂制备

•样品制备

•热循环计划

•PCR主混合

o每次反应的总体积为50μL

在准备反应时，计算还应包括阳性和阴性对照

向每个试管中加入48μL主混合物

主混合料的内容如下-

注-如果使用Taq以外的聚合酶，则使用随酶提供的PCR缓冲液和最终MgCl2浓度必须调整到3.0 mM

o向适当的PCR反应管中加入2μL不含DNase的水作为阴性对照

o将试剂盒中提供的2μL重组阳性对照DNA添加到适当的PCR反应管中

o将2μL热处理试样加入适当的PCR反应管中

o根据热循环程序运行

•琼脂糖凝胶电泳

•凝胶评价

o含有支原体感染的样品将包含约448 bp至约611 bp之间的一条（或多条）带

o含有所提供的内部对照DNA的样品将含有明显的270 bp PCR产物

可与阳性样本中发现的约448bp至约611bp带区分（见样本数据，泳道7）

内部控制表明PCR反应成功

如果内部控制带在某些样品中消失，则可能发生PCR抑制，但该带是

存在于阴性对照的PCR反应中（添加水代替测试样品）

•如果样品的PCR被抑制，则可以通过进行DNA分析来轻松去除抑制剂

提取

o如果细胞培养物被支原体严重污染，扩增约448 bp至约611 bp的产物可能

减少或完全消除270 bp的内部控制产品（见样本数据，泳道6）

o小于100 bp的低强度带表明存在非特异性自退火引物；这不是

表示肯定的结果，并且不会影响测试的精度

来源：https://www.amyjet.com/products/13100-01.shtml