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永生化猪肺泡巨噬细胞（PAM-KNU-hTERT）（货号：T0741）由艾美捷代理ABM提供，仅限科研使用，是一种经过基因修饰的稳定细胞系，来源于8周龄SPF猪的肺组织，通过携带hTERT基因的逆转录病毒载体（pFB-Neo-hTERT）实现永生化，并在1 mg/ml G418条件下筛选获得。该细胞系保留了巨噬细胞样贴壁生长特性，内源性表达CD163受体，适用于病毒致病机制及宿主细胞相互作用等研究领域。

培养条件与体系

该细胞系的推荐培养基为PriGrow II（TM002）添加5%胎牛血清（FBS）、20 µg/ml地塞米松（Sigma）及1%青霉素/链霉素溶液（G255）。培养环境为37.0°C、5% CO₂。需特别注意，血清不应进行热灭活处理。为优化细胞贴壁与生长，建议使用PriCoat™ T25培养瓶（G299）或以Applied Cell Extracellular Matrix（G422）包被的培养器皿。在首次传代后，需向培养基中加入1 mg/ml Geneticin/G418（G271）进行筛选维持，以确保细胞从冻融状态恢复后再施加选择压力。细胞群体倍增时间为24至36小时，传代比例为1:5。

冻存细胞接收与复苏

收到产品后，应首先目视检查包装容器是否存在泄漏或破损。冻存细胞需立即从干冰包装转移至低于-130°C的环境，优先选择液氮气相储存，直至准备使用。切忌将细胞储存于-70°C，否则将导致活力丧失。复苏时，将冻存管迅速置于37°C水浴中轻轻摇动，时间不超过2分钟，保持管盖高于水面以降低污染风险。随后以70%乙醇喷洒并擦拭管壁外部进行消毒，此后所有操作均须在生物安全柜内严格无菌进行。将细胞悬液转移至含5 ml预热完全培养基的15 ml无菌锥形管中，以125×g离心5至7分钟。吸弃上清后，用推荐预热完全培养基重悬细胞沉淀，接种至T25培养瓶，于推荐条件下孵育。

传代与冻存

当培养器皿达到80%汇合度时进行传代。以T75培养瓶为例，吸弃培养基后加入2至3 ml预热的0.25%胰蛋白酶-EDTA，显微镜下观察细胞脱落，通常需2至10分钟；难以脱落的细胞可置于37°C数分钟以促进解离。加入等体积完全培养基中和胰酶后，转移悬液至无菌离心管，125×g离心5分钟。吸弃上清，用预热新鲜完全培养基重悬沉淀，按所需比例分装至新培养器皿。冻存建议使用无血清CryoGuard™冻存液（TM078）或含血清冻存液（TM024）。

质量控制与注意事项

该产品通过RT-PCR和FACS进行质量控制，生物安全等级为II级。产品保证自发货之日起30天内细胞复苏活力及规格符合证书分析（CoA）与目录描述要求。批次特异性检测结果可于官网CoA数据库查询。本产品仅供实验室研究使用，不得用于动物或人类治疗、消费或诊断用途。若使用本材料产生科学发表，请按格式引用：Applied Biological Materials Inc, Cat. No. T0741。该细胞系由庆北国立大学建立。