上海创赛科技有限公司

名称:多聚甲醛溶液(4%PFA,电镜专用)

品牌:PERFEMIKER

货号:PM20806

规格:100ml/纯度:>/价格:¥69.00

规格:500ml/纯度:>/价格:¥218.00

规格:10×10ml/纯度:>/价格:¥90.00

规格:10×30ml/纯度:>/价格:¥264.00

链接:https://www.perfemiker.cn/product/1000444.html

一、产品简介

多聚甲醛溶液（4% PFA，电镜专用）是以多聚甲醛（Paraformaldehyde，CAS 30525-89-4）经热水解聚制成的单体甲醛溶液，配制于磷酸盐缓冲体系中，pH 7.4，不含甲醇。多聚甲醛粉末本身不能固定组织，必须经加热（约 60～80 ℃）解聚为单体甲醛并冷后使用——这一步决定了溶液中残留的低聚物与颗粒物含量，也正是"普通级"与"电镜专用级"的核心分界。

电镜专用（EM Grade）与普通免疫级 PFA 的差别不在"浓度"，而在洁净度：超微结构观察要求在数万至数十万倍下看不到非样品本身的颗粒，任何未解聚完全的多聚甲醛微粒、粉尘或微生物残体，都会在切片上被误判为"结构"（尤以病毒颗粒、外泌体、致密核心囊泡的形态学判读为甚）。本品在原料纯度、解聚工艺与过滤环节上按电镜要求控制，配合 pH 7.4 等渗磷酸盐体系，兼顾了渗透力、形态保存与后续锇酸/铀铅染色兼容性。

醛类固定的本质是交联而非沉淀：甲醛在蛋白氨基（—NH₂）之间形成亚甲基桥，把可溶性蛋白"就地锁定"成不溶性网络，从而终止自溶酶活性、抑制组织自溶与异溶，使细胞的三维结构得以原位保存。这也解释了它的两个固有特性——抗原表位可能被网格掩盖（免疫电镜时需权衡固定强度），以及无法固定糖类与尿酸（主要作用于蛋白质）。

二、作用机制

1. 亚甲基桥交联——醛类固定的核心化学反应。 甲醛分子与蛋白质赖氨酸残基的 ε-氨基、N 端氨基及部分侧链（组氨酸、精氨酸、半胱氨酸）反应，先形成不稳定的羟甲基加合物，再与邻近氨基缩合生成亚甲基桥（—NH—CH₂—NH—），把相邻蛋白分子共价连接成三维网络。这一"交联而非凝固"的机制，使细胞骨架、膜系统、细胞器相对位置在分子层面被"钉住"，是电镜形态保存的基础；但交联密度过高会使组织结构变脆、切片易碎，也解释了"固定时间不宜超过 24 h"的经验限度。

2. 渗透速度与固定深度的平衡。 多聚甲醛分子小、穿透力强、固定迅速，明显优于戊二醛——这是它在电镜中作为"前固定"主力的原因：能在大块组织（切至厚度 ≤ 2 mm）中实现较均匀的固定，避免"外层过度固定、内层自溶"的梯度假象。代价是对细胞基质（尤其脂类、糖原）的保存不如戊二醛，因此常规电镜常采用"4% PFA + 0.5～2.5% 戊二醛"的混合固定液，以 PFA 的渗透性换取时间与均匀性，以戊二醛的交联强度换取超微结构细节。

3. 对酶活性与抗原性的相对温和性。 相比戊二醛的双醛结构，甲醛为单醛，交联间距更短、对蛋白构象扰动相对温和，对酶活性与抗原决定簇的破坏较小。这正是免疫电镜（IEM）与电镜细胞化学优先选用 PFA（或"4% PFA + 0.01～0.5% 戊二醛"）而非高浓度戊二醛的原因——既要保住纳米级结构，又要保住抗体能识别的表位。

4. "电镜专用"级别的洁净度控制机制。 电镜级 PFA 的关键工艺在于：充分解聚使低聚物转为单体、过滤去除未溶解微粒与粉尘、控制重金属与微生物残留。这些颗粒若不除去，会与锇酸或铀/铅染液结合并在切片上显影，形成与样品无关的"黑点"，在小尺寸结构（病毒、噬菌体、细胞外囊泡、鞭毛横切）判读时最容易造成误判。此即"EM Grade"溢价的真实来源。

5. 与后续电镜流程的化学兼容性。 PFA 固定的组织保留了脂类，因而可被四氧化锇（OsO₄）后固定——锇酸与不饱和脂肪酸双键结合，既固定膜系统又提供电子反差；PFA 不引入强还原性物质，也不与铀、铅染液生成沉淀（对比之下，残留的强还原剂或未洗净的缓冲成分会造成染色污染）。此外，PFA 交联的样品可耐受乙醇梯度脱水与环氧树脂包埋，这是它能贯穿整套 TEM 流程的前提。

三、主要应用领域

（1）透射电镜（TEM）样品前固定。 作为组织块、细胞沉淀、类器官、细菌与真菌的标准前固定液；动物组织离体后 1 min 内浸入、切成厚度 ≤ 2 mm 的薄片，固定液与样本体积比 ≥ 20:1，4 ℃ 固定 4～12 h（大标本适当延长，不超过 24 h）。

（2）免疫电镜（IEM）与电镜免疫细胞化学。 用于需要在超微结构水平定位抗原的场景（如胶体金标记、免疫纳米金双标）。此用途下 PFA 特别适合单独使用或仅配低浓度戊二醛（0.01～0.5%），以最大限度保留抗原性；固定后常配合冷冻切片或低温包埋（如 LR White）以进一步保护表位。

（3）扫描电镜（SEM）与灌注固定。 用于 SEM 样品的初级固定（随后经锇酸、梯度乙醇、临界点干燥）；在整体动物实验中作为灌注固定液的组成（脑、脊髓、神经等特殊组织必须灌注固定后再取材，常用 4% PFA 单独或与 2.5% 戊二醛联用）。

（4）细胞与亚细胞结构样品制备。 培养细胞（贴壁或悬浮）、细胞爬片、血小板、精子、细胞外囊泡与外泌体等微量样品的固定；细胞须先低速离心收集成"半颗小米粒"大小的致密沉淀，再沿管壁缓慢加入固定液，不可吹散沉淀（吹散会破坏细胞间相对位置）。

（5）常规组织学与免疫组化配套。 作为 IHC、IF、ICC、流式分析的组织/细胞固定液，固定后经抗原修复（柠檬酸或 EDTA 缓冲液热修复）暴露被交联掩盖的表位；亦用于脂肪及脂类物质的固定与保存。

（6）植物、微生物与材料相关研究。 植物根、茎、叶（沿叶脉切细长条以便多面渗透）、藻类等高含水样品的固定（固定 2 h 后建议换液一次）；细菌、真菌悬浮固定；以及生物材料/植入物的界面观察——此类样品要求固定液洁净度更高，正是电镜专用级的主要价值场景。

四、总结与展望

4% PFA（电镜专用）是一瓶"看起来最简单、选起来最讲究"的试剂：成分就是多聚甲醛加磷酸盐，价格也不过几十元，但它决定了整批电镜样品的天花板——固定不到位或带入颗粒，后面所有切片、染色、拍照的投入都白费。相比普通免疫级 PFA，电镜专用级的溢价本质上是为"洁净度"和"解聚完全度"付费，这两点在数万倍放大下无法蒙混过关。