武汉艾美捷科技有限公司

一、产品概述

由艾美捷代理Epigentek推出的EpiQuik™ 羟甲基化DNA免疫沉淀（hMeDIP）试剂盒（货号：P-1038）是一套完整的优化缓冲液和试剂组合，可在高通量格式下，使用从任何物种提取的DNA，成功进行hMeDIP操作，选择性富集含有5-羟甲基胞嘧啶（5-hmC）的DNA片段。使用本试剂盒富集的羟甲基化DNA可用于多种下游应用，包括PCR（hMeDIP-PCR）和微阵列（hMeDIP-chip），以研究细胞或组织中基因特异性的羟甲基化状态。

二、关于5-羟甲基胞嘧啶

5-hmC是胞嘧啶的一种修饰形式，近期在动物组织中发现，在DNA甲基化调控、染色质重塑和基因表达（尤其是脑特异性基因调控）中发挥与5-mC重要且不同的作用。最近，5-hmC被观察到与哺乳动物受精卵的表观遗传重编程相关。然而，由于目前使用的DNA甲基化分析方法无法区分5-hmC和5-mC，导致5-hmC的基因特异性分布未知，因此其确切功能尚未完全明确。

三、产品特点

鉴于DNA中5-hmC的存在及其在基因调控中尚不明确的功能，以及产生5-hmC的酶的发现，鉴定特定基因位点的羟甲基化状态至关重要，这有助于更好地理解基于甲基化的基因功能表观遗传调控。为此，Epigentek开发了一种捕获含5-hmC DNA片段的创新方法，并将其整合至EpiQuik™ 羟甲基化DNA免疫沉淀（hMeDIP）试剂盒中。该试剂盒使用高亲和力5-hmC抗体选择性捕获含有5-hmC的双链或单链DNA片段。该试剂盒具有以下特点：

极速便捷——从输入样本到即用型羟甲基化DNA的总流程时间不足3小时，其中手动操作时间少于20分钟。

灵活格式——96条孔微板格式使检测非常易于操作：可手动一次进行一个反应，或高通量一次进行96个反应。

高效富集——阳性/阴性对照富集比大于1000。

低输入量——每个反应所需DNA量低至0.1 µg。

高重现性——通过预优化的hMeDIP条件实现高重现性。

下游兼容——兼容多种下游分析流程，包括hMeDIP-PCR和hMeDIP-chip。

四、原理与操作流程

EpiQuik™ 羟甲基化DNA免疫沉淀（hMeDIP）试剂盒包含使用从哺乳动物细胞或组织提取的DNA成功进行hMeDIP操作所需的全部试剂。该试剂盒包含阳性对照DNA片段、阴性对照非免疫IgG，以及可与阳性对照配合使用的对照引物，以证明试剂盒试剂和方案对羟甲基化DNA的富集效果。含有5-hmC的阳性对照DNA可被5-hmC抗体免疫沉淀，但不被非免疫IgG沉淀。在该hMeDIP中，5-hmC富集DNA片段的免疫沉淀在微板中于优化反应条件下进行，使hMeDIP可在3小时内高效完成。免疫沉淀的羟甲基化DNA随后被清洗、释放和洗脱。洗脱的DNA可用于多种下游应用，包括PCR（hMeDIP-PCR）和微阵列（hMeDIP-chip）。

五、简便、快速与灵活

整个hMeDIP流程步骤易于遵循，兼顾便捷与速度，从DNA剪切到hMeDNA洗脱可在3小时内完成。96条孔微板格式允许手动处理（一次一个反应）或高通量处理（一次96个反应）。试剂盒包含羟甲基化DNA片段和非免疫IgG，分别作为阳性和阴性对照，用于任何物种（包括哺乳动物、植物、真菌、细菌和病毒）的羟甲基化DNA富集。

六、选择性与高富集

独特的流程和专有试剂盒组分允许从基因组DNA样本中选择性高富集羟甲基化DNA，用于基因特异性羟甲基化分析。将实时PCR与本试剂盒结合，检测到OCT4启动子区的5-hmC富集比GAPDH启动子区高110倍，表明OCT4启动子发生羟甲基化。与甲基胞嘧啶和未甲基化胞嘧啶无交叉反应，因此仅富集羟甲基化DNA（5-hmC）。

七、与MeDIP兼容

EpiQuik™ hMeDIP试剂盒可与MeDIP流程配合使用，同时分析特定基因位点的羟甲基化和甲基化状态。