抗击肿瘤 l CDK2降解剂，超越传统CDK4/6抑制剂？

CDK2是细胞周期核心激酶，CCNE1扩增/过表达、CDK4/6抑制剂耐药是其核心临床靶点；传统CDK2抑制剂存在选择性差、CDK1脱靶毒性、易耐药问题，PROTAC（双功能降解剂）、分子胶降解剂可直接降解CDK2蛋白，兼具高选择性、克服耐药、长效抑制优势，是第四代CDK靶向药物核心方向，目前全球无上市CDK2降解剂，管线集中在临床前、I期临床阶段。

一、CDK2降解剂研究进展

1、分子胶降解剂（主流前沿方向）

无需长连接链，口服性、成药性更优，代表项目为Kymera KT200，可同时降解 CDK2与周期蛋白E，对CCNE1扩增乳腺癌、卵巢癌强效，具备血脑屏障穿透性；Plexium开发CRBN介导CDK2分子胶，可逆转CDK4/6抑制剂耐药。

2、PROTAC双功能降解剂

结构为CDK2配体连接链E3泛素连接酶配体，可精准降解CDK2；百济神州BG75098是全球首个进入I期临床的CDK2PROTAC，可单药/联合用药，针对乳腺癌、卵巢癌、肺癌；基础研究中CPS2、MRT51443等可高效降解CDK2，用于AML、实体瘤研究。

临床价值：主要解决CDK4/6抑制剂耐药（HR+乳腺癌最主要耐药机制），对 CCNE1扩增卵巢癌、三阴性乳腺癌、肺癌、白血病具有精准治疗潜力，毒性显著低于传统抑制剂。

图：KT-200工作原理

二、CDK2降解剂在研核心药企及管线

（一）国外药企

1、Kymera Therapeutics

KT-200：全球领先口服CDK2分子胶降解剂，临床前完成，2026年4月吉利德行使选择权引进，交易总额最高7.5亿美元，计划2027年提交IND；针对HR+/HER2乳腺癌、CCNE1扩增实体瘤，可透过血脑屏障。

2、Plexium

CDK2分子胶降解剂系列：CRBN依赖型，高选择性，无其他CDK脱靶，可逆转哌柏西利耐药，临床前阶段，聚焦乳腺癌、卵巢癌。

3、Arvinas

自研 CDK2PROTAC：基于 CRBN/VHL 平台，临床前优化，布局实体瘤、血液瘤。

4、其他国外药企

罗氏基因泰克：与锐格医药合作布局CDK2 降解/抑制剂管线；阿斯利康、辉瑞：布局CDK2降解剂早期管线，与自有CDK抑制剂管线互补。

（二）国内药企

1、百济神州

BG-75098：全球首个进入I期临床的 CDK2PROTAC，2026 年启动1a/1b期临床，适应症为晚期乳腺癌、卵巢癌、肺癌；百济放弃CDK2抑制剂BG68501，全力推进降解剂管线。

2、安锐生物

自研CDK2PROTAC/降解剂系列，临床前阶段；2024年Avenzo以首付款4000万美元、总交易额超10亿美元引进其 CDK2 抑制剂+降解剂项目选择权。

3、锐格医药

布局CDK2PROTAC、CDK2/4/6多靶点降解剂；核心抑制剂QR6401与罗氏合作，同步推进降解剂管线。

4、其他国内布局企业

正大天晴：已上市CDK2/4/6抑制剂库莫西利，同步布局CDK2降解剂PROTAC管线；海思科、恒瑞医药、科伦药业：CDK2降解剂处于早期发现/临床前阶段，依托PROTAC平台布局；君实生物、信达生物：布局CDK2降解剂联合免疫治疗管线。

三、CDK2降解剂相关检测

（一）CRBN/CDK2三元复合物检测

UniOne^® TR-FRET Human CDK2/CRBN PROTAC Binding Kit试剂盒

（Cat.No. UA086128） 

采用均相时间分辨荧光技术（TR-FRET），用于测定分子胶 CDK2 Degrader7及待检测化合物介导的 DDB1/CRBN 复合体与 CDK2相互作用。该方法是实现简单快速地检测能够介导DDB1/CRBN复合体与 CDK2相互作用的小分子的高通量形式。

如下图所示，DDB1/CRBN和 CDK2之间的相互作用是通过使用Eu标记的抗Tag1抗体（TR-FRET 供体）和Ac标记的抗 Tag2 抗体（TR-FRET受体）检测的。由于分子胶CDK2 Degrader7介导了DDB1/CRBN与 CDK2 的相互作用，供体抗体与受体抗体接近，供体抗体的激发会触发向受体抗体的荧光共振能量转移（FRET），使受体抗体特异性发射665nm波长的信号。该特定信号与CDK2 Degrader7 和DDB1/CRBN、 CDK2的相互作用的程度成正比。该均相实验操作简单，无需洗涤。CDK2 Degrader7（Cat.No. abs823616）

图：THUNDER TR-FRET检测CRBN/CDK2原理

图：THUNDER TR-FRET检测CRBN/CDK2检测数据

（二）CRBN/DDB1二元复合物检测

UniOne^® Human CRBN Ligand Screening Assay Kit

（Cat.No. UA086023）

人Cereblon(CRBN)蛋白配体结合检测试剂盒采用均相时间分辨荧光技术（TR-FRET），可用于CRBN抑制剂或配体的结合检测和筛选，Eu标记的检测抗体特异识别结合Tag1-CRBN/DDB1蛋白，受体标记的沙利度胺与CRBN结合，使Eu和Ac靠近，外部光源激发供体与受体之间发生能量共振转移，检测665nm波长的信号强度即可测定CRBN/DDB1与Thalidomide-Ac的结合。反应体系中加入的CRBN配体或PROTAC竞争结合CRBN/DDB1，使信号降低，配体或PROTAC浓度升高，信号降低。该均相实验操作简单，无需洗涤步骤。

图：CRBN二元检测原理示意图

图左：CRBN标准品检测；图右：结合活性和抑制剂验证

CRBN/DDB1蛋白

CRBN/DDB1通过TR-FRET技术检测活性。来那度胺与CRBN/DDB1蛋白, TR-FRET抗体在25℃ 条件下，共孵育60分钟后检测。

图：CRBN/DDB1检测数据

（三）磷酸化Rb（S807/S811）检测

THUNDER^TM TR-FRET时间分辨荧光共振能量转移是一种基于荧光共振能量转移（FRET，Fluorescence Resonance Energy Transfer）和时间分辨荧光（TRF, Time-Resolved Fluorescence）的技术，采用夹心法，检测胞内RB磷酸化水平和总RB水平。

THUNDER™ Phospho-Rb (S807/S811) TR-FRET 试剂盒（Cat.No.KIT-RBS807P-500）

HT-29细胞（40000个细胞/孔；三复孔）饥饿24小时，在37°C，5%CO₂下用连续稀释的Palbociclib处理细胞，孵育20小时。数据显示，Palbociclib可抑制HT-29细胞Rb在S807/S811位点的磷酸化。培养1h后测定Z’因子值，每个处理组共使用48个孔。Z’值为0.9，表明该方法稳定，适用于高通量。

图：THUNDER TR-FRET Phospho-Rb (S807/S811)检测数据

THUNDER™ Total Rb TR-FRET 试剂盒（Cat.No.KIT-RBT-500）

用Palbociclib处理HT-29细胞抑制总Rb，磷酸化Rb（S780）和磷酸化Rb（S807/S811）。GAPDH（作为对照测量）的水平保持稳定。

图：THUNDER TR-FRET Total-Rb 检测数据

（四）CDK2降解水平检测

1）TR-FRET方法

THUNDER™Human and Mouse Total CDK2 TR-FRET 试剂盒（新品上市）

（Cat.No.KIT-CDK2-500）

试剂盒采用TR-FRET技术原理，检测CDK2总蛋白水平，如CDK2总蛋白发生降解，则信号下降。无需洗涤和包被，无需转膜等复杂操作，仅需Add样本，Add试剂→Read

图：THUNDER CDK2检测试剂盒原理及流程

Jurkat细胞（铺板密度50000个/ 孔，实验设置三复孔），用梯度稀释的 PROTAC降解剂CPS2在37℃条件下孵育24h。Jurkat细胞（铺板密度50000个/孔，每组设置3个生物学复孔），分别用梯度稀释的两种PROTAC降解剂 ——CPS2、BSJ-04-132（选择性CDK4降解剂，本实验用作阴性对照）处理，37℃恒温孵育24小时。

2）微分裂荧光素酶技术

UA-Glo^® Nano luciferase Lytic Detection Syste（Cat.No. UA070108）采用微分裂荧光素酶技术 (Nano-luc Split Enzyme Technology) 将微荧光素酶 (NanoLuc^® Luciferase) 分成具有高亲和力的两个片段 ：大片段和小片段。微荧光素酶小片段以目标蛋白标签的形式表达，在同一反应体系中可以和微荧光素酶大片段快速结合为具有微荧光素酶活性的完整的酶分子。检测微荧光素酶大片段和小片段结合所致的微荧光素酶活性可以用于细胞内蛋白的表达，调控和降解以及蛋白相互作用等领域的研究。

试剂盒包括专有的细胞裂解液和微荧光素酶底物。该试剂盒具有检测灵敏度高，背景低，检测范围广，检测信号稳定（半衰期约3hr），适合化合物的高通量筛选。

图：Nano-luc 工作原理

微分裂荧光素酶裂解型活性检测：HEK293细胞接种于 96孔白板透明底培养板，100µl/孔，细胞密度为60-70%。转染带分裂酶小片段标签的目标分子表达质粒，每孔0.2µg DNA，48小时后按说明书检测 Nanoluc 荧光素酶活性，动态读板2小时

图：Nano-luc活性检测

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