植物氨基脱氧分支酸合成酶（ADCS）elisa试剂盒样本处理及要求

检测前准备工作：

1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。

2. 从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶，属于正常现象；放置室温，轻摇均匀，待结晶完全溶解后再配置洗涤液。可将20ml浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水稀释配置成400ml工作浓度的洗涤液，未用完的放回4℃

3. 20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。

实验原理：

试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被植物氨基脱氧分支酸合成酶（ADCS）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的植物氨基脱氧分支酸合成酶（ADCS）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品活性。

实验所需自备试验器材：

1. 酶标仪（450nm）

2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒温箱

4. 蒸馏水或去离子水

样本处理及要求：

植物组织样本ELISA检测处理方法

一、组织匀浆的制备：

1、取组织块（0.1g-0.5g）最少可到5-10mg在冰冷的PBS中漂洗，滤纸拭干，准确称重，放入5ml的匀浆管中。

2、按重量(mg):体积(ml)=1:9的比例加入9倍体积的匀浆介质于匀浆管中，冰水浴条件下,用眼科小剪尽快剪碎组织块。

3、匀浆的方式：手工匀浆，机器匀浆。

① 手工匀浆：左手持匀浆管将下端插入盛有冰水混合物的器皿中，右手将捣杆垂直插入套管中，上下转动研磨数十次（6-8分钟），充分研碎，制成10%的匀浆液。

② 机器匀浆：用组织捣碎机10000-15000 转/分上下研磨制成10%组织匀浆，也可用内切式组织匀浆机制备（匀浆时间10秒/次，间隙30秒，连续3-5次，在冰水中进行,可适当延长匀浆时间），镜检观察。

4、将制备好的10%匀浆液用普通离心机或低温低速离心机3000转/分左右,离心10-15分钟，取上清液进行测定。

二、匀浆介质：

 一般采用0.05 mol/L Tris-HCl, pH 7.4 磷酸盐缓冲液(PBS),客户可根据样本及测定指标的情况自行设定浓度,目的是保持样本的等渗环境。

三、样本保存：       

1. 植物组织样本暂时不测定，可立即低温冻存，温度越低越好，中间如不反复冻融，-20℃以下可保 存三个月,-70℃以下可保存六个月。