THP-1如何诱导分化?

HP-1（人单核细胞白血病）来自一位急性单核细胞白血病患者的血液，在实验研究中，常常诱导其分化为巨噬细胞和泡沫细胞。

本期为大家总结了分化类型及其具体实验操作。

THP-1分化为巨噬细胞

巨噬细胞是重要的免疫效应细胞，在固有免疫和适应性免疫应答中发挥重要作用。同时，它也是高度异质性的细胞，受局部微环境的影响，可活化为不同的类型，展现出不同的表型和功能。由于巨噬细胞在不同的组织环境和生理、病理条件下的异质性，巨噬细胞被分为两种主要类型：M1型巨噬细胞和M2型巨噬细胞[1]。

THP-1细胞通常用佛波酯（PMA）诱导分化为巨噬细胞，然后在PMA仍然存在的情况下：

脂多糖(LPS)(100ng/mL)、IFN-γ(20ng/mL)培养48h，诱导其向M1极化；

IL-4(20ng/mL)、IL-13(20ng/mL)培养48h，诱导其向M2极化；

最后，在无刺激物和无PMA的情况下，用无血清RPMI-1640培养基重悬细胞，可保持72h[2]。

图1. 巨噬细胞分化为M1和M2

PMA诱导THP-1步骤：

将处于对数生长期的THP-1细胞离心，用RPMI-1640培养基重悬；

加入PMA，显微镜下细胞计数，调整THP-1细胞密度为5*10^5/mL；

使PMA终浓度为100ng/mL，将细胞种入六孔板，每孔加入细胞2mL；

48h后，显微镜下观察巨噬细胞构建成功。

单核细胞THP-1用PMA诱导后，由悬浮式生长变成贴壁生长，由圆形变成不规则形态，体积进一步增大，细胞浆疏松，细胞核增大明显，可见大量明显细胞器，胞膜周围可见少量突起[3]。

图2. THP-1经PMA诱导分化为巨噬细胞

THP-1分化为泡沫细胞

THP-1细胞诱导分化为巨噬细胞后，可以通过摄取大量脂质转变为泡沫细胞，这也是动脉粥样硬化产生的原因。

将THP-1细胞经PMA诱导为巨噬细胞后，可用RPMI-1640培养基配制氧化修饰低密度脂蛋白OX-LDL，使其终浓度为80mg/L，加入六孔板中，每孔量为2mL，干预24h

油红O染色步骤：

吸出各孔中培养基，PBS漂洗三次；

4%多聚甲醛37℃固定30min；

PBS漂洗两次，油红O（1mL/孔）37℃染色20-30min；

60%异丙醇漂洗5s，不要超过10s；

马上用PBS漂洗2-3次。

单核细胞源性巨噬细胞用OX-LDL诱导24h后, 倒置显微镜下观察，巨噬细胞体积进一步增大，细胞膜突触形成明显，胞浆增加，疏松化，可见大量细胞器及吞噬的脂质小滴。油红O染色后，细胞浆内可见大量红染物质[4]。

图3. 巨噬细胞经OX-LDL诱导后用油红O染色