蛋白纯化——哪个标签是你的菜

想要纯化出一个高纯度优质蛋白，构建质粒是非常重要的一步。常见的标签如何选择，也是新手经常会遇到的问题。今天我们就来看一看吧。

标签选择总览

一、His标签
His标签由于其分子量小且价格便宜，是最常用的标签之一。His标签通常由6-10个氨基酸组成，利用多聚组氨酸对二价金属离子具有高选择性亲和力的特点，我们可以把金属离子（常用为Ni离子）通过NTA或者IDA连接在琼脂糖树脂上进行His标签的纯化。由于His标签较小，所以通常纯化后不用切除标签，并且可以和其他标签联用构成双标签。如果His标签纯化有杂带，大家可以考虑使用多个咪唑浓度梯度洗脱或者用仪器进行咪唑线性洗脱。

二、GST标签
GST标签也是常用的标签。GST标签全称为Glutathione S-transferase（谷胱甘肽巯基转移酶），可以特异性的结合其酶活底物谷胱甘肽。GST填料上固定有谷胱甘肽配基，可用于特异性纯化带有GST标签的蛋白。
GST标签可以提高蛋白表达的可溶性和表达量，并且也具有较高的纯度。一般用GST标签纯化后的条带都比较单一，可以一步得到非常高的纯度。
不过由于GST标签比较大，所以在纯化后通常需要将纯化后的蛋白上的GST标签切除。可以选择柱上酶切或者柱下酶切的方法。在构建质粒时，需要考虑到在GST标签和目的蛋白中间加上特定的蛋白酶酶切位点。

三、Strep标签
如果您想要得到非常高的纯度，或者您的蛋白有相近的难以去除的杂带，那么选择Strep标签就再合适不过了。Strep标签为一段长度仅为8个氨基酸的短肽，可以结合链霉亲和素。而现在常用的Strep填料的配基为链霉亲和素改造之后的Strep-Tactin配基，大大增加了和Strep标签的结合能力。
此外，现在的Twin-Strep标签也受到很多客户的青睐。Twin-Strep标签是由两段Strep肽段和之间的连接序列构成的，和普通的Strep标签相比具有纯度更高，可耐受变性剂等特点。

四、MBP标签
MBP标签全称为maltose Binding Protein（麦芽糖结合蛋白），以其超大分子量（42KD）而闻名于纯化界。MBP填料上的糊精配基可以特异性的结合MBP标签蛋白。MBP标签被广泛报道具有促进重组蛋白溶解的功能，在过表达目的蛋白的过程中也有助于减少包涵体。

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