JAR为人胎盘绒毛膜癌（绒毛膜上皮癌）细胞，源自一名24岁女性患者的胎盘滋养层肿瘤，呈上皮样贴壁生长，可呈单层及岛状克隆或多层堆积两种模式，倍增时间约20-30小时，是妊娠滋养层疾病、胎盘发育、滋养层侵袭与母胎界面免疫逃逸研究中应用最广的体外模型之一。该细胞保留与起源滋养细胞高度相似的生物学特性，包括侵袭组织与血管的能力，并持续分泌人绒毛膜促性腺激素（hCG）、雌激素、孕酮与人胎盘催乳素（hPL），再培养后hCG产量平均约22.5 ng/mL，是研究激素调控与滋养层内分泌功能的经典工具；同时也是化疗敏感性与耐药机制研究的常用细胞。JAR贴壁不牢，融合后形成的细胞聚集体可松散附着于培养表面且较难分散，胞体常见黑色颗粒，培养中需重点把控胰酶浓度、消化终点与血清品质，避免消化过度或机械损伤造成细胞丢失。本文针对JAR的细胞培养流程进行梳理与指导。
一、细胞复苏
1.【准备工作】配制完全培养基：RPMI 1640 （abs9484-500mL/SV30306.01）+10% FBS（abs972-500mL/SV30302.03）+1% P/S（abs9244-100ml/SV30010），取9mL于37℃预热。水浴锅预热至37℃；生物安全柜紫外照射30min。建议将装有完全培养基的培养瓶提前放入培养箱15min以上，使pH稳定在7.0-7.6后再接种。
2.【融化】从液氮取出冻存管，37℃水浴轻柔摇晃融化，约2min；融化期间保持管盖与O型圈在水面之上，减少污染风险。
3.【重悬】内容物融化后立即取出，70%乙醇擦拭或浸洗消毒外壁，此后全程严格无菌操作；将细胞悬液转入含9.0mL完全培养基的离心管中。
4.【离心】约125×g离心5-7min，弃上清，去除DMSO残留。
5.【重悬】加入1-2mL完全培养基轻轻吹打重悬；接种T25培养瓶（加入5-6mL完全培养基），十字混匀，标注名称、代次、日期。
6.【培养】放入37℃、5%CO₂培养箱静置培养。
注意：复苏后24h内尽量少移动培养瓶，JAR贴壁较慢，过早晃动会使未贴牢的细胞聚团漂浮；首次换液建议在复苏后24-48h进行。
二、细胞传代
1.【实验准备】配制完全培养基：RPMI 1640 （abs9484-500mL/SV30306.01）+10% FBS（abs972-500mL/SV30302.03）+1% P/S（abs9244-100ml/SV30010）。提前取出D-PBS（abs971-500ml/SH30028.02）与0.25%胰酶-EDTA（abs47047375-100mL/SH30042.01），恢复至室温；生物安全柜紫外照射30min。以下体积以T75瓶为准，其他规格按比例增减。
2.【镜检】汇合度达80%-90%时即可传代；细胞呈上皮样、多边形、排列成片，部分区域可见多层堆积的致密克隆（属该细胞特性）。倍增时间约20-30小时，通常2-3天可长满。
3.【细胞清洗】吸弃旧培养基，用D-PBS（abs971-500ml/SH30028.02）轻轻润洗细胞层1次，去除残留血清；沿瓶壁缓慢加入，切勿直接冲刷细胞面，JAR贴壁不牢，冲洗过猛会使细胞成片飘起。
4.【细胞消化】加入2-3mL胰酶-EDTA溶液（abs47047375-100mL/SH30042.01）覆盖瓶底，置于37℃培养箱静置，镜下观察至细胞层分散，通常2-5min；以细胞间隙变大、轻吹即下为终点，不要等到完全脱落。
注意：等待细胞脱落期间切勿敲击或摇晃培养瓶，否则细胞会成团脱落、聚团，影响后续铺板均匀度；JAR消化过度后细胞极难重新贴壁。
5.【终止与收集】加入6-8mL完全培养基终止消化，轻轻吹打使细胞脱落并分散为单细胞悬液；吹打轻柔，避免产生过多气泡。
6.【离心】约125×g离心5-7min（国内常规可用1000rpm离心4-5min），弃上清；加入完全培养基轻轻重悬。
7.【传代】按1:3-1:8的比例接种至新瓶（新手或细胞状态欠佳时建议1:2-1:3），补加完全培养基至工作体积，十字混匀，标注信息。
8.【镜检】镜下确认分散均匀后放入37℃、5%CO₂培养箱；换液每周2次。
注意：若润洗或加胰酶时已有细胞飘起，应将飘起的细胞一并收集离心、与消化下来的细胞合并接种，不可直接倒掉，否则每次传代都会损失可观数量的细胞。
三、细胞冻存
1.【准备工作】冻存液：完全培养基+5%（v/v）DMSO（abs9187-100mL）；如使用无血清细胞冻存液（abs9417-100mL）可省去程序降温步骤。冻存管标注名称、代次、冻存人、日期；安全柜紫外照射30min。
2.【细胞收集】取对数生长期、汇合度80%-90%的细胞，按传代步骤消化收集，离心后弃上清。
3.【细胞重悬】加入冻存液（约1mL/管）轻柔吹打重悬，细胞密度约2-5×10⁶/mL。
4.【冻存】每管1mL入冻存盒，-80℃过夜后转移至液氮气相长期保存。注意：-70℃存放会导致活力丧失，不可长期置于-80℃。
四、关键注意事项
1.培养基与血清
（1）标准配方为RPMI-1640 + 10% FBS，是细胞库与绝大多数文献采用的基准体系，是保种与常规维持的首选；
（2）部分实验室使用DMEM/F-12 1:1（abs9561-500ml/SV30307.01）或DMEM高糖（abs9483-500ml/SV30303.01）替代RPMI-1640亦可支持生长，但激素分泌水平与形态会有差异，做hCG等分泌实验时不建议随意更换基础培养基；
（3）该细胞对血清质量较为敏感，建议固定批号并使用优级胎牛血清（abs972-500mL/SV30302.03），血清批次更换后先做一次生长曲线对比。
2.胰酶浓度与消化终点
（1）不同品牌胰酶活力差别较大，须以镜下状态判断终点，不可照搬固定分钟数，通常2-5min，37℃可加速；
（2）消化终点为“细胞间隙变大、轻吹即下”，不要等到细胞完全脱落——JAR消化过度后贴壁能力显著下降；
3.贴壁不牢与细胞回收
（1）JAR贴壁不牢，加入PBS或胰酶时应沿瓶壁缓慢加入，避免直接冲刷细胞面；
（2）润洗或加酶过程中若有细胞飘起，须离心收集、与贴壁细胞合并接种，不可弃去；
（3）传代后24h内尽量减少移动，给细胞留足重新贴壁的时间。
4.形态与培养特征
（1）正常：上皮样、多边形，排列成片，部分区域多层堆积形成致密克隆，属该细胞固有生长方式；
（2）正常：胞体上可见黑色颗粒，属正常现象，不影响培养，不必处理；
（3）异常：细胞变圆、漂浮增多且不贴壁——多为消化过度、离心力过大或血清批次不适；细胞扁平巨大、胞质空泡化——提示老化，应复苏早期代次；
（4）异常：培养基浑浊、pH快速变酸且伴异味——提示污染，须立即隔离处理。
5.功能实验相关提醒
（1）JAR可持续分泌hCG、雌激素、孕酮与人胎盘催乳素，再培养后hCG产量平均约22.5 ng/mL；做分泌实验时须统一接种密度、血清批次与换液时间，否则批间差异很大；
（2）佛司可林（forskolin）（abs810050-25mg）可刺激hCG分泌，但JAR对forskolin的响应灵敏度低于BeWo、JEG-3，若实验以诱导分化为目的，需先做剂量预实验；
（3）涉及激素或分泌因子检测时，应设置“仅培养基”空白孔，扣除血清本底；含血清培养条件下部分激素存在本底干扰。
6.代次与质控
（1）建议使用低代次细胞开展关键实验，出现形态异常（扁平巨大、空泡化）时及时复苏早期冻存；
（2）建议定期STR鉴定确认细胞身份，JAR与JEG-3、BeWo同为滋养层来源细胞，存在混淆风险；
（3）定期支原体检测；该细胞生长密集、易多层堆积，隐性支原体污染更易被掩盖。
（4）生物安全等级为1级，常规无菌操作即可，但涉及人源肿瘤细胞，废弃物仍须按规范灭活处理。
参考资料
ATCC
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