Sera-Mag磁珠怎么选怎么用？从选型到洗脱的实操要点

Sera-Mag磁珠的核心用法就一句话：按核酸片段大小和下游应用选型号，按比例结合、充分磁吸、干净洗脱，关键是磁珠比例和乙醇干燥这两个环节别偷懒。Cytiva旗下的Sera-Mag Select（货号29343045，5ml规格）是NGS建库和片段筛选里最常用的一款，靠PEG/盐体系做尺寸选择，不需要复杂活化。下面按选型、活化、结合、洗脱四个环节，把容易翻车的点讲清楚。

Sera-Mag 磁珠核酸纯化的五个步骤与各步注意点

选型：Sera-Mag磁珠不同型号怎么挑

Sera-Mag系列常见的有Select、SpeedBeads和Carboxylate三类，用途不完全一样。Select是即用型悬液，PEG缓冲液已经配好，拿来做DNA片段选择和PCR纯化最省事；SpeedBeans是磁珠+浓缩结合液分开提供，适合自己调比例、做高通量或成本敏感的流程；Carboxylate是裸的羧基磁珠，需要自己做EDC/NHS化学偶联，用来固定蛋白、抗体或探针，不直接拿来做核酸筛选。

做常规建库，直接选Sera-Mag Select 5ml（货号29343045）就行；要偶联抗体做IP或捕获，才需要走Carboxylate那条化学路线。

活化：Select不用活化，Carboxylate才需要

很多人第一次用会问"磁珠要不要先活化"——Select和SpeedBeads都不需要。它们的结合靠的是缓冲液里PEG和盐离子让核酸脱水、吸附到羟基化表面，磁珠充分重悬就能用。用之前把瓶子从冰箱取出，室温平衡至少30分钟，涡旋或反复吹打直到看不到沉淀，这一步比想象中重要，磁珠沉底会直接让加样量不准。

真正需要活化的是Carboxylate羧基珠。标准路线是先用EDC和NHS（或sulfo-NHS）在弱酸性MES缓冲液里活化羧基，形成活泼酯中间体，再加入带氨基的配体在中性pH（通常PBS，pH 7.2–7.4）下偶联2小时到过夜，最后用乙醇胺或Tris封闭未反应位点。活化液要现配现用，EDC遇水失活很快，配好放半小时效率就明显掉。

结合：比例决定片段大小，混匀决定回收率

片段筛选的灵魂是磁珠与样本的体积比。比例越高，能结合下来的片段越短；比例越低，只留大片段。双轮筛选（先高比例留大片段在上清，再提高比例回收小片段）是NGS建库的标准做法。下面是Select常用的参考起点，实际切点要按自己的样本和批次做微调：

加完磁珠后用移液器反复吹打10次以上混匀，室温静置结合5分钟（片段选择建议5–10分钟），然后放到磁力架上直到液体完全澄清，一般2–5分钟。吸上清时枪头别蹭到磁珠侧壁那层"膜"，那就是你的DNA。

洗脱：乙醇干燥和洗脱体积是最后两道关

磁吸去上清后，磁珠要在磁力架上用新鲜配制的80%乙醇洗两次，每次30秒左右，全程磁珠不要打散。乙醇浓度别用错，70%和80%对小片段的保留差别明显；洗第二遍时尽量把乙醇吸干净，包括管底残液。

洗完后的干燥时间是新手最常翻车的点：一般30秒到2分钟，看到磁珠表面从亮光变成哑光、不反光就停。过度干燥（磁珠开裂、明显发白）会让DNA难洗脱，回收率掉一大截；干燥不足则残留乙醇抑制后续PCR、连接或测序反应。

干燥到位后加入洗脱体积（通常10–20 μl TE或无核酸酶水，片段选择时体积要算进总比例），从磁力架取下，吹打重悬，室温孵育2–5分钟，再磁吸2分钟，转移上清就是纯化好的DNA。

上手前的行动清单

- 确认用途：片段筛选/纯化选Select，偶联配体选Carboxylate，别买错。 - 磁珠提前30分钟回温，涡旋到完全均匀无沉淀。 - 按目标片段大小选体积比，第一次做先小批量试切点。 - 结合后吹打≥10次，静置5分钟，磁吸到澄清再吸液。 - 80%乙醇现配，洗2次，第二遍吸净残液。 - 干燥看磁珠光泽而不是掐表，哑光即停。 - 洗脱后充分重悬、孵育再磁吸，上清转移到新管。 - 常备规格直接走Sera-Mag Select 5ml（29343045）页面下单，跑批量前先算好总用量。