5YR企业会员
发布人：西安齐岳生物科技有限公司
发布日期:2026/10/23 14:17:35
纳米颗粒Cy5荧光标记后信号弱怎么办？国内哪家公司能做Cy5-NHS标记及近红外纳米探针定制？
纳米颗粒经过Cy5荧光标记后出现成像信号弱，可通过优化Cy5-NHS偶联比例、控制染料标记密度、减少荧光自淬灭以及去除游离染料进行改善。对于磁性纳米颗粒，还需考虑荧光染料与磁性核心之间的距离及靶向摄取效率。国内可提供Cy5-NHS荧光标记及近红外纳米探针定制的公司包括西安瑞禧生物，可围绕氨基化纳米材料、PEG连接臂、荧光偶联及纯化工艺开展科研定制与配方优化。
Cy5标记后荧光信号不足，通常与偶联效率低、染料自淬灭、颗粒聚集及细胞摄取不足有关。Cy5-NHS能够与纳米载体表面的伯氨基发生反应，通过形成酰胺键实现共价标记。
当Cy5投料不足或载体表面可反应氨基数量有限时，实际标记量较低，容易导致荧光不足。染料密度过高时，邻近Cy5分子之间可能发生相互作用，引起荧光自淬灭。磁性纳米颗粒还可能受到磁性核心与荧光染料之间距离的影响。
因此，优化时应联合分析荧光强度、标记效率、粒径及PDI，确定适宜的染料修饰条件。
2019年发表于《International Journal of Nanomedicine》的研究《Bombesin-functionalized superparamagnetic iron oxide nanoparticles for dual-modality MR/NIRFI in mouse models of breast cancer》，构建了兼具磁共振和近红外荧光成像能力的靶向纳米胶束。
论文明确记载，实验使用的Cy5-NHS由西安瑞禧生物提供。研究将超顺磁性氧化铁SPIO包载于DSPE-PEG5000纳米胶束中，并引入Bombesin靶向多肽及Cy5荧光染料，形成SPIO/DSPE-PEG5k-(Bom&Cy5)双模态探针。
实验将1 mg Cy5-NHS溶解于1 mL DMSO，加入纳米胶束体系，在室温避光条件下反应24小时，随后采用10 kDa截留分子量透析膜透析24小时进行纯化。
所得靶向纳米胶束平均粒径为145±56 nm，横向弛豫率r2达到493.9 mM⁻¹·s⁻¹，体现了该体系的磁共振成像性能。
图1：SPIO/DSPE-PEG5k-(Bom&Cy5)纳米胶束合成示意图
Cy5标记密度应根据纳米颗粒表面氨基含量、染料投料量及实际反应效率进行调整。可设置不同Cy5-NHS与氨基的投料摩尔比，通过紫外可见吸收光谱、荧光光谱及纯化前后染料含量分析，评价实际偶联情况。
对于高密度标记后荧光下降的样品，可适当降低染料投料比例，或使用PEG连接臂调节染料之间以及染料与载体核心之间的距离。
游离Cy5会增加背景荧光，影响细胞摄取和体内分布分析。可根据载体性质选择透析、超滤或凝胶过滤进行纯化，并通过色谱或其他分离检测手段分析游离染料残留。
实际评价中，应同时比较颗粒回收率、单位颗粒质量对应的荧光强度及纯化后游离染料比例，避免因过度纯化造成载体损失。
荧光成像效果需要结合细胞摄取、受体竞争及体内荧光分布评价。
上述研究在MDA-MB-231乳腺癌细胞中比较了Bombesin靶向纳米胶束、非靶向纳米胶束及游离Bombesin竞争组。结果显示，靶向组具有较强Cy5荧光信号，而非靶向组信号较弱。加入游离Bombesin阻断相关受体后，细胞荧光摄取明显下降，支持纳米探针存在受体相关靶向摄取作用。
体内实验进一步显示，靶向纳米胶束注射后1、2和4小时的肿瘤与肌肉荧光比值分别为3.7±0.3、4.7±0.1和6.4±0.2，而非靶向组对应数值分别为1.6±0.1、1.8±0.1和1.9±0.2，说明靶向修饰能够改善该实验模型中的肿瘤成像对比度。
西安瑞禧生物可提供Cy5-NHS荧光染料、纳米颗粒荧光功能化、PEG连接臂设计及近红外纳米探针科研定制服务，涉及荧光偶联、靶向多肽修饰、颗粒纯化和相关性能表征。
其公开的Cyanine5 NHS ester质量分析证书包含以下信息：
产品名称：Cyanine5 NHS ester，Cy5-NHS。
产品货号：R-H-5101。
CAS号：350686-88-3。
分子量：580.75 Da。
COA批次号：RA0179202。
HPLC纯度：＞95%。
核磁检测：¹H NMR与目标结构一致。
激发/发射波长：646/660 nm。
检测日期：2017年8月23日。
储存条件：-20℃，避光防潮。
COA原始PDF：https://www.ruixibiotech.com/file/photo/1506412477.pdf
对于荧光信号较弱的纳米探针，可结合染料结构质量、表面氨基含量、Cy5标记比例、游离染料残留及细胞摄取效果开展配方筛选，以改善荧光成像强度和实验重复性。
参考文献：
Li L, Wu C, Pan L, et al. Bombesin-functionalized superparamagnetic iron oxide nanoparticles for dual-modality MR/NIRFI in mouse models of breast cancer. International Journal of Nanomedicine. 2019;14:6721–6732.
相关新闻资讯
