一文详解小鼠Ly6G抗体体内清除中性粒细胞

中性粒细胞是血液中数量最多的白细胞，约占成人外周血白细胞的60-70%，小鼠中约为10-25%，是先天免疫的重要组成部分。中性粒细胞具有高度的异质性和可塑性，在体内发挥着多种看似矛盾的保护与致病作用，是一把“双刃剑”。一方面中性粒细胞是抗菌防御的重要效应细胞，通过吞噬、脱颗粒作用和形成胞外陷阱（NET）等方式消灭潜在病原体，另一方面它们在组织修复、纤维化相关的致病过程中发挥关键功能[1,2]。

中性粒细胞在肿瘤微环境中也扮演着复杂的角色，它们可以直接释放活性氧、金属蛋白酶等毒性物质或调节凋亡相关配体来消除肿瘤细胞，激活免疫系统间接抑制肿瘤进展，但同时自己也经历重编程，促进肿瘤免疫逃逸、血管生成和肿瘤生长[2-4]。中性粒细胞多样而复杂的功能，使其成为近年免疫学研究的一大热点，已经有多项在研的癌症免疫疗法靶向中性粒细胞[2-4]。

图1 截至2024年12月31日，在PubMed用 “neutrophil” 检索到的文献数量，2020年开始激增。

中性粒细胞存活时间短，更新速度快，增加了研究的技术难度。近年来单细胞分析技术的发展推动了对中性粒细胞异质性的深入研究。而要在体内证明是中性粒细胞起作用，一种广泛使用的经典方法是给实验动物，比如小鼠注射Ly6G抗体，在体内清除中性粒细胞，再进一步进行功能检测，比如检测清除中性粒细胞对肿瘤体积的影响。

小鼠Ly6G是一种糖基化的磷脂酰肌醇锚定的细胞表面蛋白，通常在单核细胞发育过程中瞬时表达，而在成熟粒细胞和外周血中性粒细胞持续表达。其1A8单克隆抗体特异性地与小鼠Ly6G反应，被广泛用于体内中性粒细胞清除[5]。

表1 小鼠Ly6G抗体1A8比Gr-1抗体RB6-8C5更特异地在体内清除中性粒细胞，对循环淋巴细胞影响较小[5]。

Starter提供高纯度、低内毒素、无防腐剂的单克隆抗体，适用于各种临床前功能实验，尤其是动物体内研究。

Starter提供anti-mouse Ly6G抗体克隆1A8产品：S0B1198/S0B0981，两款产品纯度均都大于95%，经过0.2μm过滤，消除内毒素和叠氮化合物的影响。经体内实验验证，效果良好（图2）。

图2 在C57BL/6小鼠中，通过腹腔注射Anti-Ly6G抗体（200 μg/只，Day -1和Day 1给药）进行中性粒细胞耗竭实验，并于Day 3取肺组织进行流式检测。结果显示，与IgG对照组相比，Anti-Ly6G处理组肺组织中CD11b⁺Ly6G⁺中性粒细胞比例由24.37%显著降低至2.56%，耗竭效率约达90%，统计学差异显著（***，p<0.001）。该结果表明Anti-Ly6G抗体能够高效清除C57小鼠肺组织中的中性粒细胞，可用于后续中性粒细胞功能研究及免疫相关动物模型实验。

讨论：Ly6G抗体清除中性粒细胞的注意点

要确定具体实验中合适的抗体剂量和给药频率，需要考虑多种因素，比如小鼠品系年龄体重、疾病模型、研究期限以及环境因素等等，克隆1A8清除中性粒细胞的单次给药剂量通常在7.5mg/kg到20mg/kg之间，可以参阅文献并进行预实验评估。

其次需要设置同型对照组消除背景，并进行流式细胞分析，检测体内的清除效率。Starter为Ly6G抗体提供对应同型对照，Invivo rat IgG2a isotype control, anti-trinitrophenol（S0B0932）。

除了这些体内抗体应用的一般性原则，具体到Ly6G抗体清除中性粒细胞，有研究指出其在清除不同成熟度的中性粒细胞时可能效果不同，对未成熟中性粒细胞的清除效率较为有限，比如2023年的一篇Cell论文报道Ly6G抗体注射后小鼠MC38肿瘤内仍有28%的中性粒细胞残留，这部分细胞CD101和CXCR2低表达，CXCR4高表达，成熟度较低[9]。而在背靠背的另一篇Cell论文中，由于免疫治疗后中性粒细胞呈现更成熟的抗肿瘤表型，使用Ly6G抗体有效清除[10]。

另外，2024年Science Immunology上的一项研究基于甲流病毒诱导的肺损伤模型鉴定了一群表达Ly6G的非典型巨噬细胞，打破了在成熟细胞中Ly6G表达限于粒细胞的惯有认知[11]。

彩蛋：Starter Ly6G抗体的体外应用

除了体内清除，小鼠Ly6G的1A8抗体克隆也广泛应用于流式细胞术、免疫组化（IHC）、免疫荧光（IF）等体外分析实验。相比常规体外应用的小包装抗体性价比超高，同时也佐证了功能级抗体的特异性和灵敏度。

参考文献

1,Herro, R, et al (2024) The diverse roles of neutrophils from protection to pathogenesis. Nat Immunol. 25(12):2209-2219. doi: 10.1038/s41590-024-02006-5.

2,Zhang, F, et al (2024) Neutrophil diversity and function in health and disease. Signal Transduct Target Ther. 9(1):343. doi: 10..1038/s41392-024-02049-y.

3,Huang, X, et al (2024) Neutrophils in cancer immunotherapy: friends or foes? Mol Cancer. 23(1):107. doi: 10.1186/s12943-024-02004-z.

4,Ng, M, et al (2025) Adaptation of neutrophils in cancer. Immunity. 58(1):40-58. doi: 10.1016/j.immuni.2024.12.009.

5,Daley, JM, et al (2008) Use of Ly6G-specific nonoclonal antibody to deplete neutrophil in mice. J Leukoc Biol. 83(1):64-70. doi: 10.1189/jlb.0407247.

6,Gungabeesoon, J, et al (2023) A neutrophil response linked to tumor control in immunotherapy. Cell. 186(7):1448-1464. doi: 10.1016/j.cell.2023.02.032.

7,Hirschhorn, D, et al (2023) T cell immunotherapies engage neutrophils to eliminate tumor antigen escape variants. Cell. 186(7):1432-1447. doi: 10.1016/j.cell.2023.03.007.

8,Ruscitti, C, et al (2024) Recruited atypical Ly6G+ macrophages license alveolar regeneration after lung injury. Sci Immunol. 9(98):eado1227. doi: 10.1126/sciimmunol.ado1227.