MSD隐藏玩法 | 方法学开发指南

在开展ELISA检测时，你是否常遇到灵敏度不足、复杂样本难以包被、背景干扰过强等问题？面对这些痛点，Meso Scale Discovery给出了自己的回答。MSD超敏多因子技术，依托石墨烯电极板与电化学发光原理，提供一个开放性实验平台，可灵活DIY各种实验。

实验流程简单易操作

MSD方法学开发流程简便，类似于高灵敏度版ELISA，无需额外学习技术。

实验设计关键点

1、包被样本类型：MSD依赖分子间相互作用力固定靶标，不局限于抗原-抗体结合，可兼容多种样本。

常见生物分子互作类型及应用：

2、检测方法选择：

直接法：操作高效，适合快速筛查

双抗夹心法：灵敏度最优、线性范围最宽，适合多数蛋白定量

桥接法：适合抗药抗体（ADA）检测

竞争法：适用于仅单一抗原表位的小分子

3、标记物-抗体组合策略：

①抗体+sulfo-tag：有纯化好的特异性一抗，适合长期稳定实验②生物素化抗体+链霉亲和素-sulfo-tag：有生物素化抗体，适合短期快速检测③通用种属二抗+sulfo-tag：适配常规一抗，省时高效

实验所需试剂与耗材

根据不同实验需求，选择不同的试剂耗材。

部分试剂耗材清单：

典型应用案例

1、核酸药物定量：杂交ECL技术检测超低浓度反义寡核苷酸药物

基于ECL法建立三种检测方案：①双探针杂交法 ②RNase保护法 ③T4 DNA连接酶法

基质效应实验：希尔斜率0.99-1.03，无明显基质干扰；基础灵敏度：预估检测下限（eLLOD）约50fM。

特异性：T4连接酶法可准确区分单碱基/双碱基缺失代谢物及3’端腺苷酸化类似物，经修改，也适配5’端磷酸化修饰分析。

信号放大：采用N-PLEX ULTRA后，灵敏度提升10-50倍，eLLOD值低至1fM。

2、抗药抗体（ADA）检测：食蟹猴血清ADC中的ADA定量

传统桥接法ADA（图A）检测背景偏高，尝试用SPEAD ADA方法改善信噪比。

SPEAD ADA法原理（图B）：生物素化药物捕获ADA，经洗涤与酸解离，将ADA转移至第二块板后再用sulfo-tag标记物检测。

使用SPEAD ADA分析方法后，阳性信号随对照浓度升高显著增强，展现出良好的反应信号，可以准确检测ADA抗体浓度变化。而随着ADC药物浓度的增加，从1.56 μg/mL升到50 μg/mL，信噪比稳定在1.25-1.5，说明药物不干扰ADA定量。

3、超高灵敏度检测：贝伐珠单抗血清定量

MSD检测步骤：包被-封闭-加样-检测-显色与读数

MSD校准曲线：动态范围为500-7000 pg/mL，锚点可延伸至250-10000 pg/mL，首次实现贝伐珠单抗的亚纳克级定量。

4、药代动力学检测：MSD-CAT检测抗体在细胞水平亲和力

MSD-CAT原理：在溶液中将抗体与表达目标抗原的细胞共孵育至平衡，离心分离后，通过电化学发光法检测上清液中未结合的游离抗体浓度，从而推算出KD值。

亲和力实验：MSD-CAT（图B）的检测结果与SPR（图A）趋势一致，信号响应甚至高出18-23倍。

MSD方法学开发平台：科研机型MESO Quickplex Q60MM

三款机型参数对比：

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实验外包服务

参考文献：

1. Performance of a Digoxigenin Antibody-Based Electrochemiluminescent Hybridization Assay: A HELISA Alternative for Low Femtomolar Detection of an Antisense Oligonucleotide

2. Detection of antidrug antibodies against antibody-drug conjugates by solid-phase extraction with acid dissociation in cynomolgus monkey serum

3. Bioanalytical methods for quantifcation of Bevacizumab in human serum: ELISA versus MSD

4. A novel label-free method to determine equilibrium dissociation constants of antibodies binding to cell surface proteins