AF488-活性酯（AF488 NHS ester）可与 DAPI 等蓝色荧光染料共同使用，实现多色检测

一、简单介绍

AF488-活性酯（AF488 NHS ester，亦称 Alexa Fluor 488 NHS ester）是一种亮绿色荧光标记试剂。其化学结构由三部分组成：AF488 荧光母核（磺化罗丹明类染料）、连接臂和 N-羟基琥珀酰亚胺酯（NHS）活性基团。该试剂的 CAS 号为 1374019-99-4，分子式为 C₂₅H₁₇N₃O₁₃S₂，分子量约 631.54 Da，外观为桔色固体或粉末，纯度通常 ≥95%，厂商：陕西新研博美。

二、基本特点

激发/发射波长 (Ex/Em)：495 nm / 519 nm（与 FITC 相近）

量子产率：约 0.91–0.92，远高于 FITC

消光系数：73,000 cm⁻¹M⁻¹

pH 稳定性：pH 4–10 范围内荧光强度保持稳定，解决 FITC 在碱性条件下淬灭的问题

光稳定性：优异，适合长时间显微成像

水溶性：良好，同时溶于 DMF、DMSO 等有机溶剂

低自淬灭：带多个负电荷，不易分子间聚集，减少荧光自淬灭

保存条件：-20°C 避光、避湿保存，避免反复冻融

核心优势：AF488 是目前最灵敏的水溶性绿色荧光标记染料之一，荧光亮度和光稳定性显著优于传统 FITC。

三、反应机理

AF488-活性酯中的 NHS酯基团 可特异性与生物分子表面的 伯氨基（-NH₂） 发生亲核取代反应，形成稳定的酰胺键，从而将荧光标记高效偶联到目标分子上。

反应条件：推荐在 pH 7.2–8.5（最佳 pH 8.3 的碳酸氢钠缓冲液）中进行，室温反应 1 小时以上。

适用范围：可标记蛋白质、抗体、多肽、胺修饰的寡核苷酸及其他含伯胺的生物分子。

四、应用场景

1. 蛋白质与抗体标记

用于将荧光染料共价偶联到抗体或蛋白质上，广泛应用于 ELISA、Western blot 等检测。

2. 免疫荧光染色与流式细胞术

标记抗体后进行细胞或组织染色，配合 488 nm 激光线进行流式细胞分析和成像。

3. 活细胞成像与细胞示踪

用于观察细胞内生物分子的动态变化，以及细胞迁移、增殖等生物学过程。

4. 多重荧光标记与双标实验

可与 DAPI 等蓝色荧光染料共同使用，实现多色检测。

5. FRET（荧光共振能量转移）实验

利用其高量子产率和长荧光寿命，检测生物分子间的相互作用。

6. 荧光纳米颗粒制备

用于制备荧光纳米探针，拓展在纳米医学和生物传感中的应用。

五、更多同类型试剂

以下为与 AF488 NHS ester 同类型的荧光染料活性酯试剂

AF350 NHS Ester 蓝色荧光 约 346/442 蓝色荧光染料活性酯

AF405 NHS Ester 蓝色荧光 适配 405 nm 激光 用于紫激光系统

AF532 NHS Ester 黄色荧光 约 532/554 黄色通道标记

AF546 NHS Ester 橙色荧光 约 556/573 —

AF568 NHS Ester 红色荧光 — 红色通道标记

AF594 NHS Ester 红色/远红荧光 — 常用于多色组合

AF647 NHS Ester 远红荧光 — 常与 AF488 配对使用

Cy5 NHS Ester 远红荧光 — 非 Alexa 系列常用染料

Cy5.5 NHS Ester 近红外荧光 — —

Cy7 NHS Ester 近红外荧光 — 深红/近红外成像

温馨提示：本文章所提供的信息仅用于科研知识分享，不构成任何操作建议，实验者应依据官方说明及原始研究文献自行判断。以上试剂仅供科研使用，不可用于人类，非药用，非食用。

文章来源：陕西新研博美生物科技有限公司小编小言